| 牛pAcGFP-FADD融合蛋白真核表达载体构建及在CHO-K1细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 杨润军,许尚忠,张路培,李俊雅,高雪.牛pAcGFP-FADD融合蛋白真核表达载体构建及在CHO-K1细胞中的表达[J].生物工程学报,2008,24(11):1880-1887. |
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| 作者姓名： | 杨润军 许尚忠 张路培 李俊雅 高雪 |
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| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学,动物科技学院,杨凌,712100;中国农业科学院,北京畜牧兽医研究所,北京,100193
2. 中国农业科学院,北京畜牧兽医研究所,北京,100193 |
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| 基金项目： | "十一五"国家高技术研究发展计划，"十一五"国家科技支撑计划重大项目"农林动植物育种工程" |
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| 摘 要： | FADD是Fas/FasL系统的一个信号连接蛋白,通过传递凋亡信号,介导细胞凋亡.为了揭示FADD在牛卵泡发育过程中的调控作用,采用RT-PCR从牛卵巢组织中扩增FADD基因,将其cDNA终止密码子删除,采用定向克隆技术连接到带有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-N1中,构建融合蛋白重组质粒,经BglⅡ/EcoR Ⅰ酶切、测序鉴定后,用脂质体介导质粒转染CHO-K1细胞,观察有无荧光的表达及用RT-PCR和Western blotting方法检测基因转录、表达情况.结果表明,成功克隆牛FADD基因,通过PCR方法在FADD阅读框两端引入了Bgl Ⅱ和EcoR Ⅰ克隆位点,并于起始位点前加入Kozak序列,成功构建pAcGFP- bFADD融合蛋白真核表达载体,重组质粒转染CHO-K1 24 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,转染效率可达65%,通过RT-PCR扩增出654 bp的转录产物,并用Western blotting检测到51.4 kD目的蛋白的表迭.
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| 关 键 词： | 重组质粒 CHO-K1细胞 |
| 收稿时间： | 26 May 2008 |
Construction of Mammalian Cell Expression Vector for pAcGFP-bFADD Fusion Protein and Its Expression in CHO-K1 Cell |
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| Runjun Yang,Shangzhong Xu,Lupei Zhang,Junya Li and Xue Gao.Construction of Mammalian Cell Expression Vector for pAcGFP-bFADD Fusion Protein and Its Expression in CHO-K1 Cell[J].Chinese Journal of Biotechnology,2008,24(11):1880-1887. |
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| Authors: | Runjun Yang Shangzhong Xu Lupei Zhang Junya Li and Xue Gao |
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| Institution: | College of Animal Science and Technology, Northwest A & F University, Yangling 712100, China; Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China;College of Animal Science and Technology, Northwest A & F University, Yangling 712100, China; Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China;Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China;Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China;Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | FADD pAcGFP-N1 |
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