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本研究报道了猪源性胆囊收缩素39肽(Cholecystokinin 39, CCK39)和猪肠道大肠菌群脲酶B亚基(UreaseB, UreB)融合的原核表达载体的构建, 以及兼有CCK39和UreB功能活性域的融合蛋白的表达。利用RT-PCR从猪十二指肠总RNA中克隆CCK39, 再通过PCR从猪肠道产脲酶大肠菌群质粒中克隆UreB, 之后将扩增所得的两基因先后定向插入原核表达载体pET43a(+)中, 构建双基因融合表达载体pET43a(+)/CCK39/UreB, 并转化至大肠杆菌(Escherichia coli) BL-21(DE3)中。重组质粒pET43a(+)/CCK39/UreB经PCR、双酶切鉴定和序列分析, 证实已成功构建双基因融合表达载体。重组表达菌经isopropylthio-b-D-galactoside (IPTG)诱导表达了分子量约为80 kD的融合蛋白, 与预期分子量相同, 主要以可溶蛋白的形式存在于细胞质中; 用Ni2+-NTA对可溶蛋白进行亲和纯化, 纯度大于95%; Western blotting分析结果显示重组融合蛋白可分别为CCK8和UreB抗血清识别, 具有良好的反应原性。本研究所表达的融合蛋白为研制抗CCK/Urease双效疫苗奠定了基础。 相似文献
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