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本研究报道了猪源性胆囊收缩素39肽(Cholecystokinin 39, CCK39)和猪肠道大肠菌群脲酶B亚基(UreaseB, UreB)融合的原核表达载体的构建, 以及兼有CCK39和UreB功能活性域的融合蛋白的表达。利用RT-PCR从猪十二指肠总RNA中克隆CCK39, 再通过PCR从猪肠道产脲酶大肠菌群质粒中克隆UreB, 之后将扩增所得的两基因先后定向插入原核表达载体pET43a(+)中, 构建双基因融合表达载体pET43a(+)/CCK39/UreB, 并转化至大肠杆菌(Escherichia coli) BL-21(DE3)中。重组质粒pET43a(+)/CCK39/UreB经PCR、双酶切鉴定和序列分析, 证实已成功构建双基因融合表达载体。重组表达菌经isopropylthio-b-D-galactoside (IPTG)诱导表达了分子量约为80 kD的融合蛋白, 与预期分子量相同, 主要以可溶蛋白的形式存在于细胞质中; 用Ni2+-NTA对可溶蛋白进行亲和纯化, 纯度大于95%; Western blotting分析结果显示重组融合蛋白可分别为CCK8和UreB抗血清识别, 具有良好的反应原性。本研究所表达的融合蛋白为研制抗CCK/Urease双效疫苗奠定了基础。 相似文献
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哺乳动物的受精过程涉及到精子一系列的功能活动,如精子在雌性生殖道的运行、精子的超活化与获能、顶体反应以及精卵融合等。在精子经历的这一系列过程中,精子功能相关的蛋白质发挥着不可或缺的作用,这些蛋白分子的正常与否与雄性个体的繁殖力高低密切相关,因此精子功能相关的蛋白质能够作为评定哺乳动物精液受精能力的生物标记。文章主要对哺乳动物精子功能相关的蛋白质进行了综述,以阐述相关蛋白分子对精子运动活力、精子获能、顶体反应、透明带穿入和精卵融合等方面的重要作用以及这些蛋白分子在家畜遗传改良上的潜在应用。 相似文献
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