绵羊肺腺瘤病毒pEGFP-C1/exJSRV-env构建及引起NIH3T3细胞恶性转化的研究

为了构建绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因真核表达质粒并观察绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白在293T细胞中的定位情况以及探讨是否可诱导NIH3T3细胞发生恶性转化,本研究采用RT-PCR技术从自然感染绵羊肺腺瘤病的病羊肺组织中克隆完整的外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(exJSRV-env),并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1中。构建好真核表达质粒经PCR、酶切和测序鉴定。同时对exJSRV-env基因进行生物信息学分析。采用脂质体法将该重组质粒转染293T细胞,观察其在真核细胞中的表达及定位情况。将该重组质粒转染NIH3T3细胞,观察细胞是否发生恶性转化。用软琼脂集落实验检查转染重组质粒的NIH3T3细胞的生长状态。结果显示真核表达质粒构建成功并命名为pEGFP-C1/exJSRV-env。exJSRV囊膜蛋白的氨基酸序列与参考株比对发现该囊膜基因的跨膜区(TM区)的胞质尾区具有外源性病毒特有的YXXM基序。系统进化树也表明我们克隆的exJSRV-env基因属于致病性的外源性病毒。运用生物信息学技术分析env基因编码的蛋白质的基本性质,并预测其可能的结构。亚细胞定位表明exJSRV囊膜蛋白主要分布于细胞膜。转染pEGFP-C1/exJSRV-env质粒的NIH3T3细胞接触抑制性消失,可在软琼脂中形成集落。说明绵羊肺腺瘤病毒的囊膜蛋白可引起NIH3T3细胞发生恶性转化。研究结果为进一步探讨exJSRV囊膜蛋白的结构和功能及其致病机理提供了实验基础。     

模拟酸雨对红壤区茶树器官氮磷含量及其化学计量比的影响

以红壤区25年生茶园为对象,开展pH 4.5、pH 3.5、pH 2.5及自来水(对照)4种强度模拟酸雨处理原位试验,于处理第3年收集茶树体不同功能根系和不同年龄枝、叶,测定氮(N)、磷(P)含量,并计算化学计量比和酸雨响应敏感度.结果表明: 土壤pH值、硝态N和有效P随酸雨强度增加而显著降低.吸收根N含量随酸雨强度增加而提高,pH 2.5处理下吸收根N含量与对照相比显著提高32.9%;储藏根P含量随酸雨强度增强而显著降低;同时酸雨处理显著提高吸收根N/P.新叶和老叶N、P含量对不同强度酸雨处理响应不敏感,但酸雨处理增加了老叶N/P,且在pH 3.5处理下达到显著水平.酸雨处理对枝条的影响与其年龄有关,新枝N含量和N/P在低强度酸雨(pH 4.5)处理下显著增加,而老枝N含量和N/P对酸雨处理响应不敏感.吸收根、新叶和新枝N含量对酸雨响应敏感度分别高于储藏根、老叶和老枝,而储藏根和叶片P含量对酸雨响应敏感度高于其他器官.茶树器官N含量对酸雨处理较为敏感,适度酸雨可增加幼嫩器官N含量和N/P,改变茶树体N、P的循环和平衡.     

水貂睾丸退化期间TGFB家族生长因子及其受体基因表达量的变化

为了探究水貂季节性睾丸退化的分子机制,本研究利用HE染色技术对不同退化时期的水貂睾丸组织进行了组织学研究,同时利用荧光定量PCR技术对不同退化时期的水貂睾丸组织中TGFB家族生长因子及其受体基因表达量变化进行了研究。结果发现在水貂睾丸退化期间,其直径逐渐缩短到原来的1/2,重量逐渐降低到原来的1/8。HE染色结果发现,4~7月水貂睾丸经历了严重退化,而且曲细精管的管腔逐渐消失,同时曲细精管的直径减小到其最大尺寸的1/3。荧光定量PCR结果发现TGFb3、INHBA、TGFBR1、ACVR2A、ACVR2B、SMAD2、SMAD4基因相对表达量在水貂睾丸退化期间都呈下降趋势。本研究表明TGFB信号通路可能在水貂睾丸退化期间发挥了重要功能。     

亚热带杉木林土壤有机碳及其活性组分对氮磷添加的响应

通过野外氮、磷添加,分析N₀(0 kg N·hm^-2·a^-1)、N₁(50 kg N·hm^-2·a^-1)、N₂(100 kg N·hm^-2·a^-1)、P(50 kg P·hm^-2·a^-1)、N₁P和N₂P等6种处理3年后对亚热带杉木人工林土壤有机碳(SOC)、颗粒有机碳(POC)和水溶性有机碳(WSOC)的影响.结果表明:氮、磷添加对0～20 cm土层SOC含量无显著影响.磷添加显著降低0～5 cm土层POC含量,与无磷处理相比,加磷处理POC含量降低26.1%.WSOC含量对氮、磷添加的响应主要表现在0～5 cm土层,低水平氮添加和磷添加显著提高WSOC含量.在0～5 cm土层,氮添加对POC/SOC值无显著影响,而与无磷添加相比,POC/SOC值在磷添加处理下显著降低15.9%.在5～10和10～20 cm土层,氮、磷添加处理对POC/SOC值无显著影响.在亚热带地区,森林土壤碳稳定性主要受磷含量的调控,短期磷添加易导致表层土壤活性有机碳分解,增加土壤碳稳定性.     

人工养殖与选育对罗氏沼虾遗传多样性的影响

为探讨人工养殖与选择育种对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)遗传多样性的影响,实验测定了孟加拉野生群体、缅甸野生群体、浙江养殖群体、广西养殖群体及选育群体"南太湖2号"共111只罗氏沼虾核糖体转录间隔区2(Internal transcribed spacer 2,ITS2)基因序列,结果发现58个碱基变异位点,定义56个单倍型。在5个群体中,孟加拉野生群体的遗传多样性最高(平均核苷酸差异数K和核苷酸多态性指数Pi分别为7.186和0.0155),依次为缅甸野生群体、浙江养殖群体、广西养殖群体,选育群体"南太湖2号"遗传多样性最低(K和Pi分别为3.032和0.0065)。5个群体间配对Fst分析表明,养殖群体与野生群体遗传分化显著(P<0.01),选育群体"南太湖2号"不仅与野生群体遗传分化显著,同时还与广西养殖群体产生了显著的遗传分化(P<0.01)。系统树显示,孟加拉野生群体和缅甸野生群体聚为一支,浙江养殖群体、广西养殖群体和选育群体"南太湖2号"则聚为另一支。研究结果表明,人工养殖和选育降低了罗氏沼虾的遗传多样性水平,并导致群体间发生了显著的遗传分化。     

4种常用水产药物对青虾幼虾的毒性研究

采用静水法研究了4种常用水产药物对青虾幼虾的毒性。结果表明：水温29℃~30℃时,溴氯海因对青虾幼虾24 h、48 h和72 h的LC50分别为19.05 mg/L、11.75 mg/L、11.75 mg/L,安全浓度为1.24 mg/L;聚维酮碘对青虾幼虾的24 h、48 h和72 h的LC50分别为49.27 mg/L、44.61 mg/L、43.68 mg/L,安全浓度为10.52 mg/L;甲醛对青虾幼虾的24 h、48 h和72 h的LC50分别为72.47 mg/L、66.41 mg/L、53.71 mg/L,安全浓度为10.93 mg/L;高锰酸钾对青虾幼虾的24 h、48 h和72 h的半致死浓度（LC50）分别为6.06 mg/L、4.07 mg/L、3.79 mg/L,安全浓度为0.48 mg/L。4种药物对青虾幼虾的毒性依次为高锰酸钾〉溴氯海因〉聚维酮碘〉甲醛。     

腹腔镜下全子宫切除术后阴道微生态乳杆菌干预的影响

目的探讨腹腔镜下全子宫切除术后阴道微生态乳杆菌干预的影响。方法 2018年3月—2019年3月间在本院接受腹腔镜下全子宫切除术治疗的患者106例,经随机数表法分为对照组、研究组,各53例。研究组患者在术后1月开始接受乳酸杆菌干预、对照组未采取任何措施。持续干预3个疗程后比较研究组、对照组患者的阴道微生态指标(pH值、菌群密集度、菌群多样性、优势乳杆菌分级),女性性功能指数(FSFI),阴道微生态失衡,阴道炎发生率以及研究组患者乳酸杆菌胶囊相关不良反应发生情况。结果术后2月,研究组、对照组pH值、菌群密集度、菌群多样性、优势乳杆菌分级差异有统计学意义(P0.05);研究组患者阴道微生态失衡、阴道炎发生率均低于对照组(P0.05)。术后6月,研究组患者FSFI评分值高于对照组患者(P0.05)。研究组患者在使用乳酸杆菌胶囊干预期间,未出现明显不良反应。结论腹腔镜下全子宫切除术后早期使用乳酸杆菌干预,在优化阴道微生态、减少阴道炎发生方面具有一定作用,且不会引发明显不良反应。