定点突变提高青霉素G酰化酶的稳定性

以大肠杆菌青霉素G酰化酶的晶体结构为模板 ,用软件PMODELING同源模建巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的三维结构。在此基础上 ,将 β亚基 4 2 7位 (突变A)和 4 3 0位 (突变B)赖氨酸残基突变为丙氨酸 ,降低了该酶的等电点 ,增加了疏水性 ,从而提高其在酸性和有机溶剂环境中的稳定性。两个突变体与亲本相比 ,比活力和Km相近 ,最适pH减少了 0 .5个单位 ,突变B在 pH 5 .2的溶液中的稳定性明显提高。突变A和B在 15 %DMF中的半衰期分别比亲本酶提高了 60 %和 166%     

蛇肌肌酸激酶cDNA的克隆,表达及同源性比较

构建了蛇肌ｃＤＮＡ文库,用抗体筛库,克隆了肌酸激酶的ｃＤＮＡ,测定了其核苷酸序列,并将完整的ｃＤＮＡ克隆到ｐＥＴ１１表达质粒,在大肠杆菌中获得高诳表达。纯化的重组肌酸激酶,与组织酶的动力学性质表现出高度的一致性。同时,比较了蛇肌酸激酶与其他种属Ｍ型肌酸激酶的同源性,确定了在爬行动物中肌酸激酶存在Ｍ型。