抗炭疽保护性抗原的单克隆抗体——Ⅰ.杂交瘤细胞株的获得

用炭疽保护性抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合,融合剂为PEG1000。用放射免疫方法筛选分泌特异抗体的杂交瘤细胞后,经有限稀释法及再克隆选择单克隆细胞,获4株能产生抗炭疽保护性抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经染色体组型分析,证明是杂交细胞。体外连续培养8个月,仍能持续稳定地分泌抗体。其中,C17杂交细胞株,从它冰冻保存的第20代细胞复苏后,又传30多代,并接种在小鼠腹腔内增殖,仍能分泌特异性抗体。用正向间接血凝法测定其培养上清液及腹水,抗体滴度分别为1:256～512,1:4,096～6,144。     

抗炭疽保护性抗原的单克隆抗体——Ⅱ.抗体的鉴定

单克隆C17细胞所分泌的抗炭疽保护性抗原的单克隆抗体,用固相放射免疫、放射性双扩散及硝酸纤维膜印迹实验,鉴定为阳性,能与此抗原特异地结合。经Protein A-SepharoseCL-4B分离提纯此抗体,再用兔抗鼠标准血清鉴定,其亚型为IgM。将此单克隆抗体偶联到Sepharose 4B上,将炭疽抗原过柱,然后把洗脱液进行电泳分析,证明C17分泌的抗体特异地针对炭疽保护性抗原中分子量为19,000道尔顿的组分。     

铜绿假单胞菌外毒素A的生产,分离纯化和鉴定

通过对培养基组成、种子活化、接种量和培养条件进行优化,使铜绿假单胞菌外毒素Ａ（ＰＥ）产量达到每毫升５－１０μｇ和１９２小鼠ＬＤ５０,不低于国外报道水平。经二步纯化,ＰＥ蛋白回收率为３３．３３％（ＰＥ）和１６．６７％（ＬＤ５０）,提纯系数为４３８．５（ＰＥ）或２１８．５（ＬＤ５０）,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ呈现一条带,相对分子质量为６６０００,琼脂糖扩散鉴定与兔抗ＰＥ产生一条沉淀线,小鼠半数致死量为０．１５