PiggyBac在转基因小鼠制备中的应用

受精卵雄原核裸DNA注射是目前制备转基因小鼠的主要技术,而转基因表达成功率低是这种技术的主要缺点。piggyBac转座子系统已被报道用于制备转基因小鼠,但这一方法是否能够提高转基因的表达成功率尚不清楚。为此,我们利用毛色基因agouti为报告基因,采用piggyBac转座子系统以C57/BL6小鼠为背景进行转基因小鼠的制备。结果表明,将piggyBac转座酶cRNA和转基因载体进行受精卵雄原核共注射后,转基因阳性率为18.4%,转基因表达率为88.89%,显著高于单独进行转基因载体DNA受精卵雄原核注射法。同时,利用agouti基因作为报告基因,可根据毛色变化直接对表达阳性的转基因小鼠进行初步筛选,提高了筛选效率。     

崖沙燕繁殖期雄鸟的鸣叫行为

2003年3月～2004年4月在南充市郊的嘉陵江边记录了崖沙燕(Riparia riparia)繁殖期雄鸟的呜叫。声谱分析结果表明,崖沙燕繁殖期有8种呜叫(恫吓叫声、屈服叫声、求救叫声、警报叫声以及4种鸣唱声)。通过对其行为的实时观察,确定了每种呜叫的生物学意义。4种叫声是整个繁殖期的主要呜叫,而4种鸣唱声则主要出现在开春以后的集群求偶与筑巢期间。虽其鸣唱声仅有两种类型的短音节,但通过组合可形成含有多达4个或6个音节的鸣唱声。鸣唱声的持续时间分别为3184、1030、1274、1232ms。鸣唱声中的间歇时间分别占持续时间的47％、39％、50％、48％。     

小麦条锈菌大片段基因组DNA的提取方法研究

由条锈菌Puccinia striiformis引致的小麦条锈病是小麦最重要的病害之一。由于其活体寄生的特点,对小麦条锈菌的遗传学和分子生物学研究十分有限,大片段核DNA的提取研究还未见报道。高分子量基因组DNA是开展大片段基因组文库构建、基因组分析以及基因组重建的重要基础,通过系统建立和优化小麦条锈菌大片段基因组DNA的分离方法,成功获得分子量大于1Mb高质量的病菌基因组DNA。     

利用CRISPR/Cas系统快速高效构建血友病乙小鼠模型

血友病乙是由凝血因子Ⅸ(Factor Ⅸ,FⅨ)缺乏或功能缺陷导致的出血性疾病,为伴X染色体隐性遗传病。小鼠模型对于血友病乙的研究具有十分重要的意义,而基因组编辑技术又为小鼠模型的构建提供了一种快捷而且高效的途径。本文利用CRISPR/Cas系统,在小鼠FⅨ基因第8外显子上选择靶位点,将Cas9 mRNA和带有靶位点的sgRNA显微注射到C57BL/6品系小鼠的受精卵中,获得基因修饰的小鼠。利用高分辨率熔解曲线分析(High resolution melting, HRM)技术进行精确基因分型,并通过测序验证,在60只小鼠中,总共有51只小鼠的靶位点发生了突变,突变率高达85%,其中雄鼠的突变率为79.5%,雌鼠的突变率为95.2%;未检测到非目标位置的基因编辑脱靶。凝血活性实验显示,突变小鼠的FⅨ活性值(Factor Ⅸ coagulant activity, FⅨ: C)是非突变小鼠的6.82%,大大低于非突变小鼠,表明突变小鼠的凝血活性缺失。本研究表明,利用CRISPR/Cas系统成功构建了人类血友病乙遗传病小鼠模型。     

微泡对气体交换影响的理论研究

依据菲克第一定律、玻意耳定律及道尔顿气体分压定律,建立微泡内外气体交换的数学模型。通过理论推导和计算机模拟,研究微泡在不同条件下对机体的肺部、动脉系统及其周围组织等不同部位微循环中气体交换的影响。理论分析结果显示,O2、CO2及N2在三个部位都呈现为由内向外的弥散过程,且在正常呼吸条件下,超声造影剂微泡不会对周围组织微循环的气体交换产生有效的生理作用。而在吸氧35%或70%的条件下,微泡的携氧量明显增加,对三个部位局部周围组织微循环的气体交换产生一定影响。