秀丽隐杆线虫先天免疫信号转导途径

秀丽隐杆线虫因其结构简单、易于培养、生命周期短等特点作为一种模式生物已广泛应用于神经系统、衰老机制及细胞程序性死亡的研究。与高等生物不同,秀丽隐杆线虫缺少适应性免疫途径,只有先天免疫途径在抗病原菌、抗氧化应激等方面发挥重要的作用。其体内的胰岛素/胰岛素样生长因子(insulin/ IGF-1)、转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)、丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)和细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)4条免疫相关信号转导途径在不同的环境发挥着主要作用。同时,秀丽隐杆线虫的先天免疫系统在进化中有许多保守之处,这为高等生物的免疫机制研究提供了新思路。据此,就有关秀丽隐杆线虫先天免疫信号转导途径的研究进展进行了简述,期望能为人类等高等生物相关联的免疫作用研究提供借鉴和参考。     

大肠杆菌16S rRNA的核酶设计和初步应用

针对细菌rRNA研发抑制细菌增殖的新型抗菌素是抗生素研究领域的新课题。细菌rRNA与基因mRNA一样自然形成折叠卷曲高级结构,其结构上可以结合反义核酸的位点即靶点,靶点的阐明是设计有效反义核酸、核酶（Ribozyme）和脱氧核酶（DNAzyme）的关键。MAST方法固定16S rRNA,将其与寡核苷酸文库杂交筛选出靶点,获得了大肠杆菌16S rRNA的6个反义核酸结合靶点,并鉴定5个靶点有效,其中1个为高效。5个靶点的反义核酸能在通透性大肠杆菌菌株培养中不同程度地抑制其生长,针对高效靶点的核酶在转化大肠杆菌中表达而抑制其生长。     

桥式PCR，一种简易连接DNA标签序列的方法

MAST方法采用人工文库的DNA标签序列鉴定mRNA的可接近位点。大量的标签序列通过扩增和克隆测序达到阐明mRNA结合位点图。设计了单一引物的PCR,其引物在标签序列两端结合搭桥,在扩增中DNA标签序列在搭桥引物的作用下进行连接,连接的标签序列再克隆和测序。十几条这样的连接产物包含了上千条标签序列。该PCR方法简单、高效以用于高通量的方式对标签序列测序。     

巨噬细胞对小鼠骨髓肥大细胞增殖的影响

巨噬细胞对小鼠骨髓肥大细胞增殖的影响崔玉芳,朱宝珍,汝小美（北京放射医学研究所北京１００８５０）近年来的研究已经证实,肥大细胞是骨髓造血干细胞的后裔,最近的研究还发现（１,２）,小鼠腹腔某种特定类型的细胞具有支持肥大细胞生长的作用。本实验观察了小鼠腹...     

γ—干扰素和地塞米松对肝素促成纤维细胞增殖的抑制作用

目的和方法 :用MTT比色 ,AgNORs (核仁组成区相关嗜银蛋白 )银染结合图像分析以及抗Ⅲ型胶原单抗免疫组化技术观察了γ 干扰素 (γ IFN)和地塞米松 (Dexa)对成纤维细胞生长的抑制作用。结果和结论 :①培养第 3d ,2 5 0× 10 3u/L的γ IFN和 10 0mg/L的Dexa对正常成纤维细胞生长的抑制率分别为 4 3 %和 3 3 % ;而培养第 5d ,相同浓度的γ IFN对 0 .0 5和 0 .10mg/L肝素刺激的成纤维细胞生长的抑制率分别为 3 4%和 4 0 % ;②照后 3d或5d ,两种抑制剂对肝素刺激的正常和照射成纤维细胞增殖均显示明显抑制作用 ;③ 2 5 0× 10 3u/L的γ IFN和 15 0mg/L的Dexa对成纤维细胞AgNORs合成显示出较强的抑制作用 ,在肝素组其AgNORs颗粒数分别为对照值的60 %和 71% ,而AgNORs 3个定量参数的均值分别为对照值的 61%和 65 % ;④培养第 3d ,上述两种浓度的抑制剂对肝素组Ⅲ型胶原阳性的成纤维细胞抑制率分别为 62 %和 66%。     

肝素对成纤维细胞促增殖作用的研究

应用核仁组成区相关嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲｓ）染色和抗Ⅲ型胶原以及抗５－溴脱氧尿苷单抗免疫组化技术,观察了肝素对体外培养的ＮＩＨ／３Ｔ３成纤维细胞增殖的影响,发现：（１）肝素能促使成纤维细胞数量增加,如０．１ｍｇ／Ｌ浓度的肝素在培养第３天成纤维细胞数量相当于对照值的１．３倍;（２）对成纤维细胞ＡｇＮＯＲｓ的合成显示出明显的促进作用,如０．２ｍｇ／Ｌ浓度的肝素培养第３天,其ＡｇＮＯＲｓ数量为对照值的２．７倍;（３）进一步分析肝素对成纤维细胞ＤＮＡ和Ⅲ型胶原合成的影响,结果表明,加入０．２ｍｇ／Ｌ肝素培养第３天,Ｓ期成纤维细胞和Ⅲ型胶原阳性细胞数分别为对照值的２．７倍和１．８倍。上述实验结果为探讨肥大细胞分秘的活性介质参与器官纤维化作用的机理进而采取相应的对抗措施提供了依据     

逆转录法筛选mRNA靶点设计核酶对GPA的表达干预实验研究

采用自行设计5’固定3’随机的文库对基因mRNA进行杂交用于逆转录反应以筛选mRNA的寡核苷酸结合靶点。对人I型跨膜糖蛋白-血型糖蛋白A （glycophorin A,GPA）的mRNA筛选了4个反义寡核苷酸可结合靶点,分别设计反义核酸（Antisense）,分别加入mRNA中用RNase H验证各靶点的核酸结合和切割效率,最终确定2个高效结合和切割靶点。再设计Ribozyme,构建表达核酶（Ribozyme）质粒,利用慢病毒（Lentivirus）包装技术,感染人源红系白血病细胞株K562细胞,在细胞水平验证其下调GPA基因表达的效果,对转染细胞mRNA进行反转录和Real Time PCR分析mRNA表达水平,并在蛋白水平进行了Western Blot分析。结果表明文库结合逆转录方法筛选靶点设计的Ribozyme具有高效率下调膜受体表达的作用,GPA为I型跨膜糖蛋白,该实验为筛选mRNA靶点提供参考方法,并对膜受体表达干预有参考价值。