工程化外泌体介导巨噬细胞清除肿瘤外泌体*

目的:通过膜表面修饰改造技术构建工程化外泌体(engineered exosomes,enExos),并以此介导巨噬细胞特异性清除膜表面富含表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的肿瘤外泌体。方法:利用表面展示技术获得膜表面展示趋化因子(chemokine 8,CXCL8)的外泌体,同时在其磷脂双分子层上修饰EGFR核酸适配体制备工程化外泌体;纳米颗粒跟踪和纳米粒度电位分析enExos的尺寸、电位;CCK-8试剂盒检测细胞活力;透射电子显微镜观察enExos与高表达EGFR的肿瘤外泌体的特异性结合;荧光成像技术及流式细胞术分析探究enExos靶向趋化巨噬细胞吞噬高表达EGFR的肿瘤外泌体。结果:成功构建膜表面展示EGFR与CXCL8的工程化外泌体,enExos可以特异性识别并捕获高表达EGFR的肿瘤外泌体,同时利用其趋化因子CXCL8特异性靶向巨噬细胞膜表面趋化因子受体CXCR1/CXCR2,刺激巨噬细胞对肿瘤外泌体的捕获及清除。结论:工程化外泌体促进了特定肿瘤外泌体的清除,为后续深入研究工程化外泌体抑制癌症转移的作用奠定基础,并期望为癌症转移治疗提供新的研究方向。     

稻田氮肥的氨挥发损失与稻季大气氮的湿沉降

通过田间小区与大田试验,对稻季期间氮肥的氨挥发损失和大气氮湿沉降状况进行了收集和监测。结果表明,每次施肥后的1～3日内氨挥发损失达到最大值,氨挥发损失受当地气候条件(如光照、温度、湿度、风速、降雨量)、施肥时期以及田面水的NH4^+-N浓度等因素的影响,大气氮湿沉降与施肥量和降雨量有关,稻季内由湿沉降带入土壤或地表水中的氮为7．51kg·hm^-2。其中,NH4^+-N的比例为39．8％～73.2％,平均为55．5％;稻季中总氨挥发量与湿沉降的NH4^+-N平均浓度和总沉降量的相关系数分别达到0．988和0．996,呈显著相关性。     

ELISA抗体检测试剂盒在狂犬病毒特免血浆筛选中的初步应用

用SepharoseCL6B纯化灭活的狂犬疫苗原液作为包被抗原,对试剂盒生产工艺进行优化,根据ELISA相对效价和SNT效价的正相关性,设计出能满足大规模狂犬病毒特异性免疫血浆筛选需要的合理可靠的收浆方案。     

人破伤风类毒素免疫血浆筛选试验中两种抗体检测方法的比较

应用酶联免疫法(ELISA)和间接血凝法(IHA)对1014份破伤风类毒素全程免疫后人血浆进行抗体水平检测,比较两者的收浆率、收浆符合率以及与动物实验的相关性。结果表明两者收浆率均达80%。ELISA法与IHA法的合格浆符合率达92%,与动物实验的相关性更好。ELISA法操作简便快速,结果判读客观明确,优于传统的IHA法,可作为人破伤风类毒素免疫血浆筛选的常规方法。     

控释掺混尿素对稻、麦土壤氮与酶活性的影响

通过大田试验,共设7个处理,即不施氮、常规施肥以及掺混控释氮肥10%、20%、40%、80%、100%处理,探讨了不同施肥处理对土壤中4种形态氮(全氮、铵态氮、硝态氮、微生物生物量氮)和3种氮功能性酶(脲酶、蛋白酶、硝酸还原酶)活性的影响,以探究控释掺混尿素对稻、麦土壤肥力和环境的影响.结果表明: 土壤全氮在稻、麦全生育期内趋于稳定,且掺混比例20%以上各控释氮肥处理在稻、麦季均无显著差异;掺混40%以上控释氮肥能有效促进稻、麦生育中后期土壤无机氮水平;随稻、麦生育期推进,掺混40%以上控释氮肥处理可显著提高土壤微生物生物量氮,但常规施肥处理的微生物生物量氮整体呈明显下降趋势;掺混40%以上控释氮肥能明显提升稻、麦生育中后期土壤酶活性,土壤蛋白酶与硝酸还原酶活性在作物生育后期均随掺混比例增加而提高,以100%控释氮肥处理土壤酶活性最高.掺混20%以上控释氮肥处理能明显降低水稻季分蘖期脲酶活性,推迟铵态氮峰值期,有利于减少氮损失;掺混40%以上控释氮肥处理均可保障稻、麦生育中后期的氮素供应,刺激土壤脲酶与蛋白酶参与氮素转换,促进了土壤氮素有效性;100%控释氮肥处理对稻、麦生育后期土壤硝酸还原酶活性增加最明显,与掺混40%～80%控释氮肥处理相比,可显著减少小麦季20～40 cm土壤硝态氮残留量,在减少氮素损失方面的效果明显.     

3株不同表型马尔尼菲青霉外分泌蛋白酶活性比较

目的探讨如何有效诱导马尔尼菲青霉蛋白酶分泌及比较3株不同表型的马尔尼菲青霉菌株之间外分泌蛋白酶活性差异。方法选用临床分离的马尔尼菲青霉B-6323株(P株)及其两个不同表型的突变株M/M株和M/Y株,用以牛血红蛋白为底物的酵母碳基琼脂培养基(蛋白酶诱导培养琼脂基)诱导其外分泌蛋白酶分泌。将pH值为4.0、5.6及7.2的蛋白酶诱导培养琼脂基平板打孔后分别等量接种上述3株菌,分别置于25℃及37℃培养6 d后,行考马斯亮兰G-250染色,测定各菌株周围的透亮圈(蛋白分解环)直径。结果以牛血红蛋白为底物的酵母碳基琼脂培养基可有效诱导马尔尼菲青霉蛋白酶分泌;3株马尔尼菲青霉在任意3种pH值培养基中培养,37℃培养下菌周透亮圈直径大于25℃培养下,差异经t检验有统计学意义。经方差分析,37℃,pH4.0、5.6、7.2培养条件下马尔尼菲青霉菌周透亮圈直径之间差异有统计学意义(F值为97.198,P=0.000 1),用SNK法进行两两比较发现pH4.0与pH7.2菌周透亮圈直径及pH5.6与pH7.2菌周透亮圈直径差异均有统计学意义。当温度为37℃或25℃时,在任意一个pH值下,均为M/M株的菌周透亮圈直径均数最大,其次为P株,M/Y株最小。结论马尔尼菲青霉在37℃,酸性培养条件(pH4.0、5.6)下外分泌蛋白酶活性大,且不同表型株之间外分泌蛋白酶活性有差异,M/M株及P株为高外分泌蛋白酶活性株,M/Y株为低外分泌蛋白酶活性株。     

转化医学真菌学实例——直接提取DNA鉴定菌种及体外药敏试验指导诊治面部难辨认癣

目的报道1例由万博节皮菌(趾间毛癣菌有性期)所致面部难辨认癣,取皮损鳞屑直接提取真菌DNA做菌种鉴定,并与真菌培养鉴定结果比较,对培养的菌落直接用抗真菌乳膏做药敏实验指导治疗。方法病变部鳞屑经KOH涂片真菌镜检阳性后,取鳞屑直接提取DNA,以真菌通用引物ITS1/4做PCR扩增后测序;同时从培养生长的菌提取DNA做分子生物学鉴定;并将抗真菌乳膏加入含菌平板孔中观察抑菌圈大小。结果鳞屑直接提取的DNA与培养获得菌落提取的DNA经PCR-测序均鉴定为万博节皮菌,诊断万博节皮菌感染所致面部难辨认癣。镜检阳性后即给予特比萘芬口服(250mg/d)及1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏外用,每周复诊并取鳞屑镜检和培养,基于药物抑菌实验结果指导治疗5周,至临床治愈和真菌培养转阴。结论鳞屑直接提取DNA做PCR-测序能及早明确菌种,待培养菌落长出后做PCR-测序验证,直接用成品抗真菌乳膏做体外药敏实验指导临床选药,动态培养鳞屑以确定疗程。此个体化诊治方案为从临床到实验室、从实验室到临床转化医学真菌学的成功实例。     

下肢深静脉血栓形成继发溃疡性皮肤曲霉菌病1例

报道1例下肢深静脉血栓形成患者继发黄曲霉引起的溃疡性皮肤曲霉病。患者男性,41岁,左小腿胫前外伤后溃烂、流脓、结痂5个月。组织病理检查见较多分隔菌丝,菌丝呈Y型分支。结合真菌镜检、培养,扫描电镜及DNA序列分析鉴定为黄曲霉。给予口服伊曲康唑胶囊及外用0．2％两性霉素B溶液治疗13周,患者皮损明显好转。     

有机物料对污染土壤上水稻生长和重金属吸收的影响

采用盆栽试验,研究了施用有机碳源、菜籽饼和猪粪对污染土壤上水稻生长和重金属吸收特性的影响.结果表明： 施用菜籽饼和猪粪均能缓解重金属对水稻的毒害作用,促进水稻生长,显著增加地上部生物量和籽粒产量,降低糙米中重金属浓度;而有机碳源抑制水稻生长.与施用化肥相比,施用菜籽饼和猪粪处理的水稻籽粒产量分别增加128.3%和67.9%;施用菜籽饼处理的糙米Cd、Cu和Zn浓度分别降低47.6%、35.2%和21.5%,施用猪粪处理分别降低9.5%、21.2%和9.3%.土壤中DTPA提取态重金属浓度与水稻地上部生物量和重金属积累总量呈显著负相关.     

欢迎加入医学真菌的世界——记第13期国家级继续医学教育项目“皮肤真菌病基础和临床研究进展讲习班”

由冉玉平教授负责的国家级继续医学教育项目"皮肤真菌病基础和临床研究进展讲习班"(编号2012-04-12-070)于2012年3月29～4月2日在成都成功举办.该项目从1998年至今已举办了13期,在我国皮肤性病学及医学真菌学同行中享有盛誉.本次课程沿袭历届传统,在邀请国内知名真菌学专家基础上,特邀纽约美国纽约州卫生部真菌中心主任、Mycopathologia杂志主编Vishnu Chaturvedi教授和日本明治药科大学杉田隆教授来蓉授课,将国内外真菌学前沿研究融入到基础与临床,为讲习班增添了不少光彩.