一种在哺乳动物细胞中研究蛋白分子转录激活活性系统的建立 |
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引用本文: | 张浩,周建光,李杰之,王健,孙玉龙,陈珊,黄翠芬.一种在哺乳动物细胞中研究蛋白分子转录激活活性系统的建立[J].遗传学报,2002,29(11):983-989. |
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作者姓名: | 张浩 周建光 李杰之 王健 孙玉龙 陈珊 黄翠芬 |
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作者单位: | 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目 (编号 3 0 0 70 2 96)~~ |
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摘 要: | 为了在哺乳动物细胞中建立一套用于研究蛋白分子转录激活活性的系统,首先以质粒pTe-Off和真核表达载体pCDNA3.1B(-)/myc-his为基础,分别构建重组质粒pZHO1(用于插入待测基因并作为该系统的阴性对照),pZHO2(用于作阳性对照),此外,该系统还包括质粒pTRE-luc(编码Firefly荧光素酶报道基因)和质粒pRL-TK(编码Renilla荧光素酶基因,用作内参对照),为验证该系统的可行性,分别将质粒pZHO1,pZHO2,pZHO3(编码p53分子N端转灵激活区73个氨基酸片段,作为实验组)与质粒pTRE-luc和pRL-TK共轨染至C4-2,MCF-7,COS7 3种不同的细胞株中,通过检测各转染组细胞中Firefly荧光素酶相对活性的大小来判断该系统的可行性,结果表明,所构建的系统可以在哺乳动物细胞中检测目的分子的转录激活活性。
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关 键 词: | 哺乳动物细胞 蛋白分子 转录激活活性 双荧光素酶报道系统 Tet-Off |
文章编号: | 0379-4172(2002)11-0983-07 |
修稿时间: | 2002年4月24日 |
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