菠菜CBF转录因子基因片段的克隆及序列分析

根据拟南芥CBF基因序列的保守区设计合成一对特异引物,以菠菜基因组DNA为模板,采用PCR扩增的方法扩出一条DNA特异片段并克隆到pMD18-T载体中。用PCR法和酶切分析法对克隆片段进行鉴定并进一步进行核苷酸序列分析。序列测定该片段长为423bp。OMIGA2.0软件分析结果表明,该片段的推断氨基酸序列与黑麦(AAL35759)、小麦(AAL37944)、拟南芥(AAC78646)、大麦(AAL84170)的同源性分别为33.8%、33.1%、30.8%和30%。     

拟南芥JR1基因片段的克隆及分析

根据拟南芥CBF基因序列的保守区设计合成一对特异引物,以菠菜基因组DNA为模板,采用PCR扩增的方法扩出一条DNA特异片段并克隆到pUC18载体中。用酶切和测序分析法对克隆片段进行鉴定并进一步进行核苷酸序列分析。序列测定该片段长为430bp。OMIGA2.0软件分析结果表明,该片段与已报道的拟南芥JR1序列的一致性为99.1%。     

LeWRKY1基因的克隆及分析

采用RT-PCR和RACE技术克隆了番茄LeWRKY1 cDNA（Genbank登录号为FJ654265）全长,用生物信息学的方法对其进行分析,预测其编码的蛋白的定位和功能。同时利用Northern杂交技术分析了JA（jasmonic acid）或SA（salicylic acid）刺激时LeWRKY1在野生型番茄和番茄JA不敏感突变体jail（JASMONATE-INSENSITIVE1）及番茄JA生物合成突变体spr2（prosystemin-mediated responses2）中的表达情况。LeWRKY1 cDNA序列全长1 740 bp,阅读框1 083 bp。生物信息学分析表明LeWRKY1含有1个WRKY结构域和1个C_2H_2型锌指结构。LeWRKY1可能是一种定位于细胞核的DNA结合蛋白,并可能具有转录调控、信号传导功能。表达分析推测LeWRKY1的表达是JA依赖而非SA依赖性的,且LeWRKY1的表达不依赖于生物体内JA的从头合成。     

植物伤反应中的茉莉酸类信号

植物伤反应包括伤信号的产生、传递、感知和转导。植物伤反应信号通路是一网络系统。茉莉酸类是植物伤反应中的重要信号分子,乙烯、ABA、系统素、水杨酸、过氧化氢等也参与伤信号转导。伤反应信号通路与其他生物、非生物胁迫反应信号通路交互作用,使植物能够在时空上对不同的胁迫做出正确响应。     

拟南芥叶细胞游离钙离子的测定

低温(4℃)条件下将钙离子荧光探针Fluo-3／AM导入拟南芥叶细胞,利用激光共聚焦显微技术检测了胞内钙离子荧光强度的分布。实验证明,低温导入Fluo-3／AM法测定拟南芥叶细胞中钙离子荧光强度的变化切实可行。茉莉酸(JA)处理能够诱导胞内游离钙离子浓度的升高。     

茄子品种遗传多样性的RAPD检测与聚类分析

用RAPD分子标记的方法对来自不同国家的34份茄子品种进行遗传多样性分析,从120条RAPD引物中筛选出有效的22条引物分别对34份茄子品种进行扩增,共检测出232个等位基因位点,每条引物平均检测出10.5个,其中192个为多态位点,多态位点比率为82.76%。POPGENE结果分析表明,Nei's基因多样性H为0.2756,Shannon指数为0.4145,显示出丰富的遗传多样性。计算得出的Jaccard相似系数变化范围为0.331～0.805,根据Jaccard相似系数和组内连接法建立的系统聚类图,34份茄子大致可分为两大类型:圆茄类型和长茄类型,这与经典的形态学分类基本上相符,从而从分子水平上支持了以果形作为茄子品种分类指标的观点。     

植物伤反应中的茉莉酸类信号

植物伤反应包括伤信号的产生、传递、感知和转导。植物伤反应信号通路是一网络系统。茉莉酸类是植物伤反应中的重要信号分子,乙烯、ABA、系统素、水杨酸、过氧化氢等也参与伤信号转导。伤反应信号通路与其他生物、非生物胁迫反应信号通路交互作用,使植物能够在时空上对不同的胁迫做出正确响应。