1,25-二羟维生素D3法建立高钙血症大鼠模型的研究

目的:以1,25-二羟维生素D3诱导建立高钙血症动物模型.方法:将40只Wistar大鼠随机分为4组,每组10只.分别将1,25-二羟维生素D3以高中低(4μg/kg,2lμg/kg,0.5μg/kg)三个剂量组连续灌喂Wistar大鼠2周,空白对照组灌喂2mL生理盐水.眼球丛静脉取血后All定大鼠血钙值及血液的生理生化指标.结果:以2μg/kg浓度的1,25-二羟维生素D3灌喂之后,大鼠血钙值显著上升(P<0.05),同时其它生理生化指标和对照组无明显差异.注射降血钙药物1.25mg/kg帕米麟酸二钠(pamidronate)或200mIU/kg密钙息(Miacalcic)均能有效抑制该模型大鼠的血钙升高.结论:采用1,25-二羟维生素D3为诱导物是建立实验性高钙血症大鼠模型的一种可行方法.     

HBV PreS1-EGFP融合表达质粒高效转化毕赤氏酵母的研究

目的:实现HBV PreS1-EGFP融合表达质粒高效转化毕赤氏酵母.方法:分别将乙肝病毒前S1蛋白和绿色荧光蛋白克隆到表达载体pPIC9K,获得重组质粒pPIC9K-EGFP-preS1,Sac1位点酶切线性化,采用醋酸锂(LiAc)和二硫苏糖醇(DDT)对巴斯德毕赤氏酵母Pichia Pastoris GS115预处理,在电压1.5 kv、电容25 F条件下进行电击转化.电击后立即迅速稀释在冰预冷的1 M的山梨醇中,混匀后取100 l的菌液均匀涂布YNBG平板,利用HIS4标记筛选转化子.结果:发现改进后的转化方法pPIC9K-EGFP-preS1的转化率提高到164×10 4个转化子/1μgpPIC9K-EGFP-preS1 DNA,是传统方法的6.6倍.结论:采用改进后的方法能有效的提高质粒pPIC9K-EGFP-preS1的转化率,为筛选高表达HBV PreS-EGFP融合蛋白的转化子打下基础.     

酿酒酵母表面展示鲑鱼降钙素多肽的研究

目的:实现酿酒酵母表面展示鲑鱼降钙素.方法:人工合成鲑鱼降钙素(Salmon cacitonin,sCT)编码基因,克隆到表面展示载体M-pYD1上.用NocⅠ酶切重组质粒M-pYD1-sCT和空白质粒M-pYD1,回收sCT和V5表达框片段后分别以LiAC法转化酿酒酵母EBY100菌株,分别得到重组酵母yAGA2-sCT和yAGA2-V5.两种重组酵母分别经半乳糖诱导表达后,采用FITC荧光标记酵母表面展示的sCT和V5多肽,分别用荧光显微镜和流式细胞仪进行定性和定量分析.结果:诱导12h后,荧光显微镜下清晰观测到了工程菌表面有重组sCT,流式细胞分析结果表明10000个细胞中65.2%的yAGA2-sCT菌株表达了外源sCT,52.4%的yAGA2-V5菌株表达V5.结论:利用酿酒酵母表面展示鲑鱼降钙素多肽获得了成功,为口服型鲑鱼降钙素的研发奠定了基础.     

绿茶阿拉伯半乳糖蛋白的分离、纯化及肝脏靶向性的初步研究

目的:从绿茶中分离纯化阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs),对其肝脏靶向性进行初步研究.方法:将脱色后的绿茶粉末在80 7℃加水(1:20,w/v)浸提1.5 h,获得的上清浓缩后用乙醇沉淀,收集重新溶解后在离子交换色谱Q Sepharose Fast Flow柱(20 mm×60cm)和Sephadex G100柱(16mm×60cm)纯化,收集主要含糖组分,冷冻干燥后获得绿茶AGPs,对其进行单糖组成、氨基酸组成、蛋白含量、糖醛酸含量分析.分别以200、400和800 mg/kg.d 3种剂量的绿茶AGPs灌胃昆明小鼠,2周后处死.取肝脏测定湿重和肝糖元含量.结果:分离纯化获得的绿茶AGPs分子量约为100kDa,是一种主要单糖组成为阿拉伯糖和半乳糖、舍有一定量糖醛酸、蛋白含量低于10%的水溶性糖蛋白.初步研究发现绿茶AGPs与其它来源的AGPs一样具有肝脏靶向性.结论:绿茶AGPs的安全性和肝脏靶向性使其在药品输送上具有良好的应用前景.