新城疫病毒V_4株NP基因的克隆、序列测定及真核表达载体的构建

研究新城疫病毒 ( NDV)核衣壳蛋白基因的生物学作用 ,以提纯的 NDV V4 株基因组 RNA为模板 ,化学合成 NP基因的特异核苷酸引物 ,RT- PCR扩增 NP基因 c DNA,得到一条 1 .5kb的DNA带 ,与 NDV NP基因大小一致 ,平端连接克隆到 p UC1 1 9质粒中 .阳性克隆经酶切鉴定及序列分析表明已获得新城疫病毒 V4 株 NP基因克隆 .将 NDV V4 株 NP基因碱基序列与已发表的NDV Beaudettec C株、La Sota株、D2 6株的 NP基因的碱基序列比较 ,同源性分别为 90 .64%、90 .1 7%、98.0 3% ,氨基酸序列差异率是 4.50 %、5.93%、2 .45% .NDV V4 株 NP基因与已发表的NDV Beaudettec C株、La Sota株、D2 6株的 NP基因有所不同 ,但具有高度同源性 .将 NDV V4 株NP基因 c DNA克隆到 pc DNA3 真核表达载体中 ,构建表达 NP蛋白真核质粒