构建稳定表达RFP及嘌呤霉素抗性的K562细胞株

目的构建稳定表达红色荧光蛋白（red fluorescent protein,RFP）和嘌呤霉素（puromycin）抗性的K562．PM．RFP细胞株,便于慢性粒细胞性白血病研究中K562细胞的观察和筛选。方法采用PCR法获得RFP片段,将其插入到慢病毒pGC-FU-3FLAG-IRES—Puromycin载体中获得pGC—PM—RFP重组质粒,经脂质体转染到293T细胞中获得慢病毒LV—PM—RFP,有限稀释法检测慢病毒在293T细胞中的转染效率,用包装获得的慢病毒感染K562细胞,经嘌呤霉素筛选获得RFP阳性的K562-PM—RFP细胞株。结果PCR及测序结果证实目的基因RFP正确克隆至慢病毒质粒中,经慢病毒LV—PM-RFP感染的K562细胞能在嘌呤霉素抗性培养基中存活,并稳定表达RFP。结论成功构建了慢病毒重组质粒pGC—PM-RFP,并获得了携带RFP及嘌呤霉素抗性基因的K562-PM—RFP细胞株。     

奶牛源乳酸菌的分离、鉴定及其微生态制剂的研究

为筛选出能用于防治奶牛子宫内膜炎的益生性乳酸菌菌株并以其为原材料制作微生态制剂,采集产后30～50 d健康奶牛的子宫颈口处分泌物,利用MRS选择性培养基厌氧培养方式进行乳酸菌初步筛选。纯化得到的单株菌株进行染色和镜检,将典型的乳酸菌进行生化鉴定。提取其DNA,扩增16S rDNA全序列并测序,将所得序列与NCBI核酸数据库进行同源性比对,明确各分离菌株种属归属。将鉴定得到的单株乳酸菌过滤以及离心获取上清,得到的上清进行抑菌实验。采用琼脂扩散法检测对大肠埃希菌的抑菌活性。以得到的良好抑菌能力的菌株为原材料进行混合抑菌,进行微生态制剂最优比例的探究,并研究这些菌株的生长曲线和产酸能力。结果显示,经染色镜检、生化鉴定和16S rDNA测序分析和单株抑菌实验得到6株较好的抑菌能力的乳酸菌,其中鼠李糖乳杆菌、魏斯式细菌和粪肠球菌的混合上清抑菌效果最好,具有较强的生长和产酸能力。研究得到了可用于防治奶牛子宫内膜炎益生菌株,可进一步用于临床试验探究。     

光周期变化对毛健夜蛾交配和产卵的影响

【目的】毛健夜蛾Brithys crini(Fabricius)可为害葱莲Zephyranthes candida等石蒜科绿化植物,前期研究表明不同光周期对其交配和产卵节律行为及交配率和产卵量均有显著影响。本实验期望探明间歇光照等复杂光照条件对毛健夜蛾交配和产卵的影响。【方法】在光照培养箱条件下(光源为白色日光灯,光照强度约为500 lx),观察了间歇光照长度(20,10,5,1和0 min)、暗期位点(D10:00-22:00,D12:00-24:00,D14:00-02:00和D16:00-04:00)和非24 h光暗循环(4L∶4D,8L∶8D,24L∶24D和48L∶48D)3种光照条件下毛键夜蛾成虫交配及产卵行为。【结果】间歇光照长度为20,10,5,1和0 min时,成虫交配数分别为0,3,10,14和11对,配对数分别为25,29,31,39和26对;间歇光照长度为20和10 min时,交配数与对照组差异显著;10,5,1和0 min时已交配单雌产卵量差异不显著(分别为354.67,322.30,339.57和310.45粒)。暗期位点为D10:00-22:00,D12:00-24:00,D14:00-02:00和D16:00-04:00时,成虫交配数分别为13,18,15和12对,配对数分别为16,19,17和16对,交配数差异不显著;已交配单雌产卵量差异不显著(分别为516.15,527.28,495.53和458.50粒);交配起始时间、交配高峰时间和产卵起始时间、产卵高峰因暗期位点不同而异。非24 h光暗循环(4L∶4D,8L∶8D,24L∶24D和48L∶48D)条件下成虫交配数分别为16,15,14和14对,配对数分别为18,16,14和16对,交配数差异不显著;已交配单雌产卵量差异显著(分别为590.56,559.67,497.21和419.29粒)。【结论】这些结果显示毛健夜蛾交配和产卵行为主要发生在暗期,暗期短于40 min时不能发生交配行为,暗期位点和长度对交配和产卵行为有影响。