12/15 脂氧酶在脑卒中的作用研究进展

脂氧合酶(LOX)是一类广泛存在于动植物中的非血红素铁蛋白,催化底物生成各种类花生酸物质,与人体的肿瘤、哮喘、炎症、动脉硬化等疾病密切相关。12/15脂氧酶(12/15-LOX)是一种脂质过氧化物酶,可以催化亚油酸,花生四烯酸等多不饱和脂肪酸生成具有生物活性的代谢产物,通过信号转导在许多病理生理过程中发挥着重要的作用,有研究表明,12/15-LOX通路可以刺激炎症因子的产生,参与多种炎性反应,而在脑卒中的发生发展以及病理过程中始终伴随的炎性反应,炎症及细胞因子等对脑卒中有一定的影响,在脑卒中炎症反应继发性脑组织损伤病理发展过程中起着重要的作用。因此,研究12/15-LOX与脑卒中炎症的关系,可以为临床治疗脑卒中提供新的靶点。本文就12/15-LOX在脑卒中后炎症反应中的作用做简要介绍。     

茶树幼苗钾累积利用特性模型的构建

通过水培试验和建立数学模型,定量研究了茶树幼苗新梢发育期间树体钾含量与培养液钾浓度、新梢与树体钾含量之间的关系,并探讨了钾促进茶树幼苗叶绿素合成和提升光合作用的量效关系.结果表明:随培养液钾浓度增加,全株、新梢、茎部和根部钾含量先升后降,在6.82～8.65 mmol·L^-1范围达到最大,呈正态分布曲线模型,而成熟叶钾含量呈直线增加,试验范围内未出现下降;新梢、成熟叶和根部对全株钾累积贡献较大,其最大钾含量分别为20.04、16.02、12.03 mg·g^-1,全株的最大钾含量为10.53 mg·g^-1,茎部不同部位的最大钾含量在8.08～8.27 mg·g^-1;新梢在较低钾浓度(3.65 mmol·L^-1)可达到较高的钾累积效率(1.22),表现出较强的钾累积能力.新梢钾含量与成熟叶和全株钾含量呈直线关系,与茎部钾含量呈一阶指数关系,而与根部存在较强的钾竞争,在钾浓度＞5.13 mmol·L^-1时,根部钾累积效率开始下降,向新梢的钾供应减少.成熟叶片净光合速率(P_n)和新梢叶绿素含量随钾含量增加呈Boltzman曲线上升,并通过模型确立了提高P_n和促进叶绿素合成的最佳钾含量范围(成熟叶为10.03～10.83 mg·g^-1,新梢为17.72～19.11 mg·g^-1)和最佳水培钾浓度区间(4.69～5.96 mmol·L^-1).     

鳞状细胞癌抗原SCCA基因的构建、表达及鉴定

目的:重组人鳞状细胞癌抗原(SCCA)的基因及表达融合蛋白,为下一步建立新的肝癌诊断方法奠定基础.方法:提取子宫颈癌细胞株(hela)中的总RNA,应用RT-PCR、PCR等技术扩增出SCCA基因,将其分别与PET-32a及PGEX-4T-1载体连接,转化入DH5α菌中进行克隆,并测序鉴定.异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转入工程质粒的BL21菌中表达SCCA融合蛋白(分别含有HIS,GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定.结果:经RT-PCR、PCR扩增后成功获得一条450bp的DNA片段,经测序鉴定与预期序列一致;并成功在大肠杆菌中实现了高表达,经Western blotting鉴定为SCCA融合蛋白.结论:成功获得SCCA目的基因并获得高纯度的SCCA融合蛋白,为进一步开发针对肝癌的SCCA诊断试剂打下基础,开辟诊断肝癌新途径.     

人结合珠蛋白cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达和鉴定

目的：克隆人结合珠蛋白（haptoglobin,Hp）cDNA,并在大肠杆菌中表达和鉴定。方法：从Hela细胞中分离总RNA,采用RT-PCR方法获得人Hp cDNA,分别克隆至原核表达载体pET-32a和PGEX-4T-1,转化至大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,并进行SDS—PAGE及Western blot鉴定。结果：成功构建了高效原核表达质粒PET-32a-Hp和PGEX-4T1-Hp;Western印迹结果表明,经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达了分子量约30kD和37kD的目的蛋白;表达产物经Ni2^＋-NTA离子交换树脂纯化,纯度〉90％。结论：在E．coli成功表达和纯化了人Hp融合蛋白,为进一步开发人Hp诊断试剂打下基础。     

人结合珠蛋白cDNA 克隆及其在大肠杆菌中的表达和鉴定

目的：克隆人结合珠蛋白（haptoglobin,Hp）cDNA ,并在大肠杆菌中表达和鉴定。方法：从Hela 细胞中分离总RNA,采用RT-PCR 方法获得人Hp cDNA,分别克隆至原核表达载体pET-32a和PGEX-4T-1,转化至大肠杆菌BL21,IPTG 诱导表达,并进行SDS-PAGE 及Western blot 鉴定。结果: 成功构建了高效原核表达质粒PET-32a-Hp 和PGEX-4T1-Hp;Western 印迹结果表明,经IPTG 诱导,在大肠杆菌中表达了分子量约30 kD和37 kD 的目的蛋白;表达产物经Ni2+-NTA 离子交换树脂纯化, 纯度>90%。结 论：在E.coli成功表达和纯化了人Hp 融合蛋白,为进一步开发人Hp 诊断试剂打下基础。