稀土离子对CaM及Ca2+-Mg2+-ATPase活力及CD研究

研究了稀土离子（Ｌｎ３＋）对钙调蛋白（ＣａＭ）调控的Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ的活力影响。结果表明,在ＣａＭ和Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ的体系中,一些Ｌｎ３＋（Ｌａ３＋、Ｇｄ３＋）对由ＣａＭ调节的Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ的活力影响呈现双相效应,即Ｌｎ３＋在低浓度时,能提高激活Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ的水解活力;在高浓度时,则抑制ＣａＭ调节Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力的能力;少数Ｌｎ３＋（Ｓｍ３＋）仅表现出抑制效应。在无ＣａＭ的Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ体系中,高浓度的Ｌｎ３＋抑制Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ的基础活力。结合圆二色（ＣＤ）谱信息对Ｌｎ３＋和ＣａＭ相互作用的分子机制进行了初步的探讨。     

人内皮脂酶584C→T变异型真核稳定表达载体的构建及其对人脐静脉内皮细胞生长的影响

目的:构建人内皮脂酶(endothelial lipase,EL)野生型和584C→T变异型真核稳定表达载体及相应的转染细胞模型,为研究584C→T变异对内皮脂酶功能的影响奠定基础。方法:从pMIG/hEL及pMIG/hEL584C→T中双酶切分离出目标片段,与pCMV-N-his载体连接,凝胶电泳、双酶切电泳及测序鉴定构建的野生型和584C→T变异型内皮脂酶载体,而后以Lipofectamine LTXPLUS为转染试剂,将其转入人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),G418筛选出稳定表达细胞,荧光定量PCR法检测转染细胞的EL表达,同时观察细胞形态,并用CCK-8法检测转染对细胞生长及细胞倍增时间的影响。结果:凝胶电泳及双酶切电泳结果显示条带位置与预期符合,测序结果表明其序列与GenBank上序列一致。荧光定量PCR法及mRNA电泳均显示:野生型和584C→T变异型转染细胞的EL表达显著高于空载体转染细胞。进一步研究584C→T变异对HUVEC细胞生长的影响,结果表明空载体、野生型EL和584C→T变异型EL转染HUVEC细胞与正常细胞的形态基本一致,且生长曲线和细胞倍增时间也无显著差异。结论:本实验成功构建了人内皮脂酶野生型和584C→T变异型真核稳定表达载体及相应的转染内皮细胞模型。EL584C→T变异对HUVEC细胞生长无明显影响。     

甲烷氧化过程中铜的作用研究进展

甲烷生物氧化在全球甲烷平衡和温室效应控制中扮演着重要的角色,而铜是甲烷生物氧化过程中的重要影响因子.一方面,铜是调控不同类型甲烷单加氧酶表达的主要影响因子,是组成颗粒性甲烷单加氧酶的必需金属元素;另一方面,在自然环境体系中,铜含量及其形态的变化对甲烷氧化菌的分布、代谢甲烷和非甲烷类有机化合物的能力以及甲烷氧化菌的特异性铜捕获系统也会产生较大影响.准确把握铜在甲烷生物氧化过程中发挥的作用将有助于全面了解甲烷生物氧化过程,进而更好地指导甲烷氧化微生物在温室气体减排及非甲烷有机物污染修复中的应用.本文主要从铜的角度,概述了铜对甲烷氧化菌的分布和活性的影响,介绍了铜在调控甲烷单加氧酶的表达和活性以及调节甲烷氧化菌铜捕获系统方面的作用,并展望了其研究方向.     

异丙肾上腺素导致大鼠心肌损伤的酶组织化学及超微结构观察

健康成年Ｗｉｓｔａｒ大鼠５０只,雌雄各半,体重２１０±２０ｇ。正常对照组１０只,实验组４０只,每只大鼠皮下注射盐酸异丙肾上腺素（ＩＳＰ）５．０ｍｇ／ｋｇ,在注射后４、１２、２４、４８小时,分别处死１０只大鼠,取出心脏,进行（１）ＨＥ染色,（２）组化染色,按Ｐｅａｒｓｏｎ法显示ＳＤＨ,用物镜测微网计算每组ＳＤＨ活性产物的缺失面积;（３）超微结构观察,按立体学图像分析原理,用《多功能医学图像处理系统》微机计算各组电镜片中线粒体体密度值。本实验的观察表明：心肌细胞ＳＤＨ在注射ＩＳＰ后显示出不同的阶段性变化;ＳＤＨ的活性产物缺失部位与ＨＥ染色的心肌坏死部位一致;心肌ＳＤＨ的活性变化与线粒体的损伤同时出现,并与线粒体的破坏程度密切相关。