豹纹鳃棘鲈体色变异的色素细胞差异分析

为了揭示豹纹鳃棘鲈(Plectropomus leopardus)体色变异机制, 研究选取了不同体色个体的样本, 利用石蜡切片、冰冻切片及体视显微镜观察等方法揭示不同皮肤部位色素细胞的类型、分布和数量的差异, 并对应激和非应激状态下色素细胞的变化进行了研究。结果显示, 黑色素细胞在背部和尾部分布比较密集, 在腹部较为稀疏, 黑色个体的黑色素细胞数量较红色个体多; 在应激状态下个体能迅速发生体色变化, 主要由于色素细胞快速扩张和收缩导致。研究为进一步揭示豹纹鳃棘鲈体色变异的分子机制和优良品种选育奠定了基础。     

黄颡鱼小RNA病毒qPCR检测方法的建立与应用

黄颡鱼小RNA病毒（Yellow catfish Picornavirus,YCPrV）是黄颡鱼重要的致死性病原，本研究旨在建立一种快速、精准的YCPrV检测方法。基于YCPrV 22426-8毒株RdRp基因编码区序列设计特异性引物和探针，通过质粒标准品和标准曲线的制作，反应体系和反应条件的优化，灵敏度和特异性的测试，建立一种检测YCPrV的TaqMan荧光定量PCR(qPCR)方法。结果显示，在绘制的qPCR标准曲线中，拷贝数与Ct值具有良好的线性关系，相关系数（R2）为0.9974，扩增效率为88.98%，最高检测灵敏度为5.09×100拷贝。该方法对来自黄颡鱼、鲫鱼、鲤鱼和虾的其它8种病毒无扩增信号，仅YCPrV具有扩增曲线，对临床样品阳性检出率比普通PCR高12.28%。自然感染黄颡鱼组织中YCPrV检测结果发现，病毒载量从高到低依次为肠、肾、心、肝、脾、鳃和脑。以上结果表明，本研究建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏度和可重复性，临床检测YCPrV时，建议优选肾和心作为检测靶标组织。YCPrV qPCR方法的建立，可为YCPrV的精准定量检测和疾病...     

基于SecA基因的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法的建立及进化分析

为对诺卡氏菌病进行快速早期诊断,建立了鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)TaqMan qPCR检测方法。以鰤鱼诺卡氏菌的管家基因SecA为靶标设计引物和探针,对反应条件进行优化,制作标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性测试,并将建立的方法应用于临床样品的检测。结果表明,优化后,引物和探针终浓度分别为0.3和0.1μmol/L,退火延伸温度60℃时,qPCR在9.85×10¹⁰—9.85×10⁰ copies内呈良好的线性关系,灵敏度最高达9.85 copies;重复性实验结果显示,组间和组内变异系数均小于1%;特异性结果表明,对无乳链球菌、弗氏柠檬酸杆菌和维氏气单胞菌等13种病菌均无扩增曲线;临床对42份大口黑鲈样品进行检测,结果表明,qPCR检出率比普通PCR提高14.24%;对发病大口黑鲈的组织及结节部位检测显示,结节部位菌载量大幅高于非结节部位,最高相差1000倍;SecA基因分析结果显示,SecA基因在传代中和种内高度保守,种间具有一定的离散性,是个很好的用于诺卡氏菌种鉴定的靶基因。研究建立的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方...