亚砷酸诱导分化的急性早幼粒细胞白血病细胞浸润人脑膜组织的体外模拟及其分子机制研究

目的:探讨急性早幼粒细胞白血病(Acute promyelocytic leukemia,APL)合并中枢神经系统白血病的发病机制。方法:采用流式细胞术检测亚砷酸(Arsenious acid, ATO)诱导分化前后的APL细胞及人APL细胞株NB4细胞表面CD56、CXCR4的表达;用荧光染料-羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记ATO分化的APL(APL/ATO)、NB4细胞(NB4/ATO);用微重力旋转培养法体外模拟APL细胞浸润人脑膜组织,观察组织学及超微结构。结果:ATO诱导后,APL/ATO细胞表面CXCR4的表达明显高于诱导前(35.2±9.5%vs. 18.6±4.9%);NB4/ATO细胞表面CXCR4的表达明显高于诱导前(39.6±2.6%vs. 21.0±7.3%);APL/ATO细胞表面CD56的表达明显高于诱导前(36.6±8.9%vs. 25.8±5.15%);NB4/ATO细胞表面CD56的表达明显高于诱导前(44.6±8.4%vs. 25.6±2.4%)。组织学实验结果显示对照组脑膜组织未见NB4、APL细胞浸润,实验组可见APL/ATO、NB4/ATO细胞浸润到人脑膜组织中;荧光显微镜下可见被标记的APL/ATO、NB4/ATO细胞浸润到人脑膜组织中,扫描电镜见APL/ATO、NB4/ATO细胞浸润到脑膜组织中。结论:本研究采用微重力旋转培养系统体外模拟了ATO诱导分化的异常早幼粒细胞浸润人脑膜组织,APL细胞和NB4细胞CXCR4、CD56的表达升高可能是ATO诱导治疗APL所致的中枢神经系统浸润的分子机制之一。     

ATRA诱导分化的NB4细胞浸润裸鼠肺组织模型的建立

目的:建立全反式维甲酸(ATRA)诱导分化的NB4细胞浸润裸鼠肺组织模型,为探讨诱导分化综合征(DS)的发生机制、预防和治疗提供研究平台。方法:首先,取对数生长期的NB4细胞在ATRA诱导下、在RPMI 1640培养基中、在37℃和5%CO2的条件下培养,72 h后收获诱导分化后的NB4细胞接种裸鼠尾静脉。然后,30天后处死裸鼠取肺组织,用G显带方法检测裸鼠肺组织的染色体核型,HE染色观察裸鼠肺组织学,电子显微镜观察超微结构,RT-PCR法和FISH技术检测裸鼠肺组织PM L-RARa m RNA转录本及PML-RARa基因的表达。结果:实验组染色体核型符合NB4细胞特征,在组织学和超微结构上明显见到分化的NB4细胞浸润裸鼠肺组织,检测到PM L-RARa m RNA转录本和PML/RARa融合基因;对照组未见到分化的NB4细胞浸润裸鼠肺组织,PML-RARa m RNA转录本和PML/RARa融合基因检测阴性。结论:用ATRA诱导分化的NB4细胞成功的建立了浸润裸鼠肺组织模型,为探讨诱导分化综合征(DS)的发生机制、预防和治疗提供了研究平台。     

中国对虾精子顶体反应的超微结构和蛋白成分变化的研究

用卵水 (eggwater)对中国对虾纳精囊内精子进行人工诱导顶体反应 ,并分别用透射电镜和SDS—PAGE及复性单向电泳对顶体反应的超微结构变化和蛋白成分的变化进行了研究。结果表明 ,中国对虾精子在人工诱导条件下 3 0min内有 5 0 %以上完成反应。电镜观察证明 ,中国对虾精子的顶体反应可分为两个阶段 :(1 )棘突的收缩 ;(2 )顶体颗粒的释放和顶体帽的消失。在反应过程中许多蛋白被降解 ,且反应开始后精子本身释放出一些水解酶类 ,主要有 2 0 0kDa、1 3 0kDa、66kDa、5 3kDa、48kDa和 41kDa 6种。在对卵水成分的初步分析中发现两种分子量约 2 0 0kDa的蛋白。     

中国对虾精子顶体反应的超微结构和蛋白成分变化的研究

用卵水（egg water)对中国对虾纳精囊内精子进行人工诱导顶体反应,并分别用透射电镜和SDS－PAGE及复性单向电泳对顶体反应的超微结构变化和蛋白成分的变化进行了研究。结果表明,中国对虾精子在人工诱导条件下30min内有50％以上完成反应。电镜观察证明,中国对虾精子的顶体反应可分为两个阶段;（1）棘突的收缩;（2）顶体颗粒的释放和顶体帽的消失。在反应过程中许多蛋白被降解,且反应开始后精子本身释放出一些水解酶类,主要有200kDa、130kDa、66kDa、53kDa、48kDa和41kDa 6种。在对卵水成分的初步分析中发现两种分子量约200kDa的蛋白。