作物数量遗传学基础 二、遗传力及其估算

两栖类染色体的研究,过去多使用以生殖 细胞和端蚌尾部上皮细胞为材料的水低渗压片 法^[6]。然而,生殖细胞和峪蚌组织受季节的限 制颇大,所得的中期分裂相亦不甚多。随着 低等脊稚动物组织培养技术^[1,2]与血液培养技 术^[3]的发展,近年来已更多的使用离体培养的 细胞来进行研究。     

两例事故受照者染色体畸变分析及生物剂量估算

应用外周血淋巴细胞染色体畸变和CB微核分析方法,对2000年河南许昌“3.06”60Co辐射事故1例受照者(A)和2000年河南开封“6.26”辐射事故一例过量放射性核素内污染致γ射线照射受照者(B)的生物剂量进行估算。结果表明,“A”和“B”两例受照者依据双+环率估算的剂量分别为1.44Gy和0.15Gy,CB微核率估算的剂量分别为1.43Gy和0.22Gy,与用物理方法估算的剂量比较接近,亦与放射损伤的临床诊断一致。泊松分布检验证实,“A”偏离泊松分布,受到不均匀照射。提示染色体畸变和CB微核分析是非常可靠的生物计量估算方法。 Abstract:Biological doses were estimated by using the yields of dicentrics plus rings(dic+r) and cytokinesis-block micronuclei (CBMN) for two victims of the accident radiation occurred on Mar 6,2000 in the City of Xuchang(victim A),and Jun 26,2000 in the City of Kaifeng(victim B),Henan Province,respectively.The results indicated that the equvalent whole body doses based on the standard dose-response curves established by the analyses of dic+r and CBMN were estimated to be 1.44Gy and 1.43Gy(victim A),and 0.15Gy and 0.22Gy(victim B).These doses were very consistent with the mean doses calculated from physical measurement and conformable to the clinical dianosis.The dic+r aberrations of victim A did not accord with Poisson distribution.The analyses of chromosomal aberrations and CBMN are an extremely reliable method in biological dosimetry.The radiation which victim A was exposed to was heterogeneous.     

60Co事故受照人员远期细胞遗传学效应观察

对三例钴源事故受照人员照后6(7)年和11(12)年两次细胞遗传学随访结果表明,两次随访受照者染色体畸变率分别为4.29%和3.63%,均显著高于对照组(P<0.01),但两次随访间未见显著差异(P>0.05),而且第一次随访染色体畸变是以双+环和无着丝粒断片为主,第二次随访是以易位、缺失和倒位为主;两次随访受照者微核率分别为4.17‰和1.17‰,第二次随访微核率明显下降(P<0.01)。提示随着照后时间推移, 非稳定性染色体畸变逐渐丢失,稳定性染色体畸变仍保持在较高水平。     

盐藻肌动蛋白基因启动子驱动的bar基因表达作为核转化筛选标记

运用基因组步行方法克隆盐藻肌动蛋白基因5′上游调控序列,发现相对于ATG上游-573和-424bp的位置上分别有75bp长的两个重复序列。没有典型的TATA盒,但有两个TATA样结构、一个CCAAT结构和一个与GCTC(G／C)AAGGC一致的序列。以700bp的盐藻肌动蛋白基因启动子区序列驱动bar基因的表达作为转化盐藻的筛选标记。转化的藻细胞暗光恢复24h后,在含0．5μg／mL除草剂的培养基中常规培养生长1周,然后将细胞平铺于含0．5μg／mL除草剂的固体培养基上继续筛选培养。约20d后从固体培养板上挑选出5个藻落并作了进一步培养和分析。结果显示,5个转化藻中携带bar嵌合基因的整合位点均位于核基因组内。Southern blotting分析表明,仅有一个转化藻整合单拷贝的bar基因,而另外4个转化藻株则包含多个拷贝bar基因片段,提示盐藻核基因转化主要是外源基因的随机整合,外源基因在转化盐藻中的整合拷贝数并不影响其除草剂抗性。RT-PCR方法证明了bar基因在转化藻中的转录。5个转化藻在含除草剂的液体培养基中维持生长了至少7个月,表明核基因转化的稳定性。     

发根农杆菌转化大豆的研究

本文利用发根农杆菌感染大豆不同外植体,在成熟胚靠近子叶节部位诱导产生毛状根。经冠瘿碱检测表明,毛状根及由此产生的愈伤组织均有甘露碱存在,说明Ri质粒的T-DNA已整合到大豆的转化根及愈伤组织中。转化根再生实验表明,在含NAA和IAA8mg/L的MS培养基上得到不定根的分化,MS和B_3培养基及6％蔗糖对转化丛生芽的诱导有利。转化的丛生芽在MS基本培养基上进一步长成小植株。     

杜氏盐藻DCA1启动子内GT重复序列在盐诱导调控中的作用

为了研究杜氏盐藻双拷贝碳酸酐酶（DCA1）启动子中高度重复的GT序列在盐诱导表达时的调控作用,设计不同的引物,通过PCR法获得6条不同长度的DCA1启动子片段,分别与gus报告基因融合后构建6个表达载体;电击法转化杜氏盐藻细胞。组织化学染色和荧光定量法检测GUS在不同盐浓度下的瞬时表达。结果显示,DCA1启动子内高度重复的GT序列无论与其上游、下游或上下游片段同时结合均能驱动gus基因的表达,并且其表达受氯化钠浓度调控,其中和上下游均结合时活性最强;无GT重复序列的融合片段及GT 重复的下游片段也能驱动gus基因的表达,但其表达不受氯化钠浓度调控;而GT重复的上游片段不能驱动gus基因的表达。结果提示:盐藻DCA1启动子中高度重复的GT序列在盐诱导调控中起重要作用,可能为一种新型的盐诱导元件。     

两例事故受照者染色体畸变分析及生物剂量估算

应用外周血淋巴细胞染色体畸变形和CB微核分析方法,对2000年河南许昌“3.06”^60Co辐射事故1例受照（A）和2000年河南开封“6.26”辐射事故一例过量放射性核素内污染致γ射线照射受照（B）的生物剂量进行估算。结果表明,“A”和“B”两例受照依据双＋环率估算的剂量分别为1.44Gy和0.15Gy,CB微核率估算的剂量分别为1.43Gy和0.22Gy,与用物理方法估算的剂量比较接近,亦与放射损伤的临床诊断一致。泊松分布检验证实,“A”偏离泊松分布,受到不均匀照射。提示染色体畸变和CB微核分析是非常可靠的生物计量估算方法。     

60Co事故受照人员远期细胞遗传学效应观察

对三例钴源事故受照人员照后6(7)年和11(12)年两次细胞遗传学随访结果表明,两次随访受照者染色体畸变率分别为4.29%和3.63%,均显著高于对照组(P<0.01),但两次随访间未见显著差异(P>0.05),而且第一次随访染色体畸变是以双+环和无着丝粒断片为主,第二次随访是以易位、缺失和倒位为主;两次随访受照者微核率分别为4.17‰和1.17‰,第二次随访微核率明显下降(P<0.01)。提示随着照后时间推移, 非稳定性染色体畸变逐渐丢失,稳定性染色体畸变仍保持在较高水平。 Abstract：　The analyses of chromosome aberrations and micronuclei in peripheral blood lymphocyte were performed in 3 cases exposed to 60Co radiation accident in 6(7) years and 11(12) years after irradiation. The results show that the frequencies of chromosome aberrations in exposed cases were 4.29% in 6(7) years and 3.63% in 11(12) years after irradiation, respectively, and the difference was not significant in the two times follow-up study. Most of the chromosome aberrations were acentric and dicentric chromosomes in first time follow-up study, and translocation, deletion and inversion chromosomes in second time follow-up one. The frequencies of micronuclei in exposed group were 4.17‰ and 1.17‰ in the two times follow-up study, respectively, and the rates of micronuclei in second time follow-up study were much lower than that in first one. The results indicated that the unstable type aberrations were gradually lost as time goes on ,and the level of stable type aberration was of high degree.     

杜氏盐藻两种碳酸酐酶基因启动子的克隆和功能研究

将克隆得到的杜氏盐藻DCA7和CA基因的启动子区与bar基因和NOS polyA终止子片段融合,分别构建成pMDDC-B和pMDC-B转基因杜氏盐藻表达载体。用基因枪法将两种表达载体转化人杜氏盐藻细胞,通过除草剂草丁膦筛选培养获得转化藻株,对转化藻株进行分析。对转化杜氏盐藻藻株的筛选培养结果表明：pMDDC-B和pMDC-B载体中的外源bar基因能在杜氏盐藻细胞中稳定或瞬时表达。同时在氦气压力为690kPa条件下,微弹轰击2次比微弹轰击1次或3次的效果更好。对pMDDC-B转化杜氏盐藻得到的稳定表达的转化藻株进行的PCR和Southern印迹分析的结果表明：外源的bar基因确已整合到杜氏盐藻基因组中。Northern印迹分析表明：DCA7基因启动子驱动bar基因在杜氏盐藻细胞中的表达效率受氯化钠浓度梯度调控。推测首次克隆得到的DCA7基因启动子可能是一种活性高、安全性好的高渗诱导性启动子;杜氏盐藻DCA7和CA基因启动子区的GT高度重复序列,可能与杜氏盐藻高度耐盐的分子机制有关。