百合无症病毒单克隆抗体的制备及检测应用

用百合无症病毒(Lilysymptomlessvirus,LSV)免疫的BALBC鼠脾细胞与SP20鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得4株能稳定传代并分泌抗LSV单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞(2A2、5H9、5H2和5E12),并分别制备它们的单抗腹水。4株单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10-6,5H9和5E12的抗体类型及亚类均为IgG1,而2A2和5H2均为IgG3,4株单克隆抗体的轻链均为κ链。利用单克隆抗体建立了抗原包被间接ELISA(ACP-ELISA)检测LSV的方法。病叶作1300倍稀释、提纯LSV病毒浓度为18ngmL(每孔的病毒绝对量为1.8ng)时,该方法仍能检测到病毒。利用ACP-ELISA检测了田间样品,发现LSV在百合上发病很普遍。     

单抗免疫斑点法和组织印迹法检测百合无症病毒

应用抗百合无症病毒（Lily symptomless virus,LSV）的单克隆抗体,建立了快速检测田间样品的免疫斑点法（Dot—ELISA）和组织印迹法（Tissue blot-ELISA）体系。LSV单抗稀释2,000倍时,Dot-ELISA中病叶粗汁液可被检出的最大稀释度为1：640。Tissue blot—ELISA中样品一次平切后第1次印迹与Dot—ELISA样品1：40稀释的结果相当,前4次印迹均可获得满意的显色效果。常规Tissue blot-ELISA的灵敏度低于Dot—ELISA,但用丙酮处理点过样的硝酸纤维素膜后,二者的灵敏度相当,且Tissue blot—ELISA操作更简便,适合田间大量样品的快速检测。