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1.
建兰花叶病毒单克隆抗体的制备及检测应用   总被引:1,自引:0,他引:1  
用建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得3株能稳定传代并分泌抗CymMV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞(2C6、5B7和12G9),分别制备它们的单抗腹水。其中5B7和12G92株单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10-6,3株单抗的抗体类型及亚类均为IgG1,轻链均为κ链。利用单克隆抗体建立了抗原包被间接ELISA(ACP-ELISA)检测CymMV的方法。蝴蝶兰病叶作1∶10240倍稀释、提纯CymMV病毒浓度为4.87ng/mL(每孔的病毒绝对量为0.487ng)时,该方法仍能检测到病毒。利用ACP-ELISA方法检测了田间样品,发现CymMV在兰花上发病很普遍。  相似文献   
2.
应用抗百合无症病毒(Lilysymptomlessvirus,LSV)的单克隆抗体,建立了快速检测田间样品的免疫斑点法(Dot-ELISA)和组织印迹法(Tissueblot-ELISA)体系。LSV单抗稀释2,000倍时,Dot-ELISA中病叶粗汁液可被检出的最大稀释度为1∶640。Tissueblot-ELISA中样品一次平切后第1次印迹与Dot-ELISA样品1∶40稀释的结果相当,前4次印迹均可获得满意的显色效果。常规Tissueblot-ELISA的灵敏度低于Dot-ELISA,  相似文献   
3.
分别以接种感染芜菁花叶病毒(TuMV)和健康时照的青菜苏州青品种(Brassica chinensis L. cv.Suzhou)和芥菜温州芥菜品种(B.juncea L.cv.Wenzhou)叶片为材料提取完整叶绿体,用胰蛋白酶消除其表面蛋白后,抽提总蛋白,经SDS-PAGE电泳和Weste rn blot检测,发现TuMV的外壳蛋白(CP)存在于感病寄主的叶绿体中.免疫金标记电镜实验显示TuMV-CP定位在感病青菜和芥菜的细胞质和叶绿体中.对两种寄主植物叶片的叶绿素荧光动力学参数测定结果显示,青菜、芥菜的Fv/F.、Fv/Fm、φPSII、qp值都有不同程度的降低,qN值增大.实验结果表明TuMV侵染后在寄主细胞叶绿体中积累的CP,抑制了光系统Ⅱ (PS Ⅱ)的光化学活性,这可能是影响寄主植物光合作用的一个重要原因.  相似文献   
4.
百合无症病毒单克隆抗体的制备及检测应用   总被引:1,自引:0,他引:1  
用百合无症病毒(Lilysymptomlessvirus,LSV)免疫的BALBC鼠脾细胞与SP20鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得4株能稳定传代并分泌抗LSV单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞(2A2、5H9、5H2和5E12),并分别制备它们的单抗腹水。4株单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10-6,5H9和5E12的抗体类型及亚类均为IgG1,而2A2和5H2均为IgG3,4株单克隆抗体的轻链均为κ链。利用单克隆抗体建立了抗原包被间接ELISA(ACP-ELISA)检测LSV的方法。病叶作1300倍稀释、提纯LSV病毒浓度为18ngmL(每孔的病毒绝对量为1.8ng)时,该方法仍能检测到病毒。利用ACP-ELISA检测了田间样品,发现LSV在百合上发病很普遍。  相似文献   
5.
转禽冠状病毒免疫原基因马铃薯及其对小鼠的免疫原性   总被引:4,自引:0,他引:4  
为了探索禽冠状病毒免疫原基因在植物中表达的可行性 ,将传染性支气管炎病毒 (IBV) ZJ971毒株S1基因定向克隆到pBI1 2 1质粒的 35S启动子下游。用三亲交配法将重组质粒导入EHA1 0 5根癌农杆菌 ,建立了一种由农杆菌介导的马铃薯转化体系 ,其愈伤形成率达 1 0 0 % ,芽的分化率达 95 %。经PCR和Southern印迹检测证明 ,IBVS1基因已整合到植物基因组内 ,获 4 7株转基因植株。Northern印迹和ELISA分析表明 ,转基因植株中IBVS1基因能正常转录和翻译。转基因马铃薯的BALB/C小鼠免疫试验结果表明 ,0 .5g和 1 g剂量转基因马铃薯免疫小鼠 ,2 1天后的抗体ELISA效价分别达 1∶2 0~ 1∶4 0和 1∶80 1∶1 6 0 ,中和抗体效价分别达 1∶1 6 5~ 1∶5 6 2和 1∶330~ 1∶2 0 4 8,说明禽冠状病毒免疫原基因的转基因马铃薯表达产物具有免疫原性  相似文献   
6.
分别以接种感染芜菁花叶病毒(TuMV)和健康对照的青菜苏州青品种(Brassica chinens L.cv.Suzhou)和芥菜温州芥菜品种(B,jucea L.cv.Wenzhou)叶片为材料提取完整叶绿体,用胰蛋白酶消除其表面蛋白后,抽提总蛋白,经SDS—PAGE电泳和Western blot检测,发现TuMV的外壳蛋白(CP)存在于感病寄主的叶绿体中。免疫金标记电镜实验显示TuMV—CP定位在感病青菜和芥菜的细胞质和叶绿体中。对两种寄主植物叶片的叶绿素荧光动力学参数测定结果显示,青菜、芥菜的Fv/Fo、Fv/Fm、φpsⅡ、qp值都有不同程度的降低,qn值增大。实验结果表明TuMV侵染后在寄主细胞叶绿体中积累的CP,抑制了光系统Ⅱ(PS Ⅱ)的光化学活性,这可能是影响寄主植物光合作用的一个重要原因。  相似文献   
7.
重组表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白的抗原特性分析   总被引:3,自引:0,他引:3  
将猪圆环病毒2型(PCV2 )去核定位信号衣壳蛋白(Nuclearlocalizationsignal_defectedcapsidprotein ,dCap)与谷胱甘肽_S_转移酶(GST)融合,在大肠杆菌中表达,经纯化和凝血酶剪切分别获得纯化的GST_dCap融合蛋白和dCap蛋白,Westernblot结果表明二者都能与猪抗PCV2血清发生特异性反应。dCap蛋白免疫小鼠制备的单克隆抗体,不仅能特异地与GST_dCap融合蛋白、dCap蛋白和纯化的PCV2粒子发生反应,而且能特异地与PK_15细胞内的PCV2病毒颗粒发生反应,其中抗dCap蛋白的单克隆抗体4C4、3F6和2G7具有阻止病毒感染细胞的能力。表明原核表达的dCap蛋白完全或部分正确模拟了PCV2天然衣壳蛋白的构像,PCV2衣壳蛋白存在阻止PCV2病毒感染细胞的功能性表位。同时重组PCV2dCap蛋白的获得为进一步研究Cap蛋白晶体结构和将重组的dCap蛋白作为抗原建立血清学诊断试剂及疫苗研究提供了基础  相似文献   
8.
微生物发酵液中生物素含量的ELISA测定   总被引:9,自引:0,他引:9  
生物素与亲和素具有很强的亲和力,本文利用这一特性建立了一种直接竞争抑制的酶联免疫法(ELISA),用于检测微生物发酵液中生物素含量.当标准品生物素含量在0.5~20μmol/L范围内,它与抑制率(I)负对数呈线性关系,因此发酵液样品中生物素含量可从标准曲线上查得。该法简便、准确,而且不需对样品作任何预处理。  相似文献   
9.
以太湖稻区和国内其他地区的39个香稻品种,以及籼型恢复系2个对照品种为研究材料,利用SSR分子标记进行DNA指纹图谱构建和遗传多样性分析。从40对国标中公布的水稻SSR引物中筛选出13对核心引物,在41个水稻品种中共检测到36个多态性片段。据此建立41个水稻品种的DNA指纹图谱,进行聚类分析,发现供试41个品种的遗传相似系数在0.58以上,而供试香稻品种的遗传相似系数在0.64以上,基本反映了不同品种间的亲缘关系。  相似文献   
10.
分别以接种感染芜菁花叶病毒(TuMV)和健康对照的青菜苏州青品种(Brassica chinensis L. cv.Suzhou)和芥菜温州芥菜品种(B.juncea L. cv.Wenzhou)叶片为材料提取完整叶绿体,用胰蛋白酶消除其表面蛋白后,抽提总蛋白,经SDS-PAGE电泳和Western blot检测,发现TuMV的外壳蛋白(CP)存在于感病寄主的叶绿体中。免疫金标记电镜实验显示TuMV-CP定位在感病青菜和芥菜的细胞质和叶绿体中。对两种寄主植物叶片的叶绿素荧光动力学参数测定结果显示,青菜、芥菜的Fv/Fo、Fv/Fm、φPSII、qp值都有不同程度的降低,qN值增大。实验结果表明TuMV侵染后在寄主细胞叶绿体中积累的CP,抑制了光系统II(PS II)的光化学活性,这可能是影响寄主植物光合作用的一个重要原因。  相似文献   
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