一种新的标记核糖核酸3′末端的方法

T_4RNA连接酶可以把[5′-~(32)p]核苷-3′,5′-双磷酸连接到RNA的3′羟基上,用此方法标记的RNA可以用于3′末端及其邻近的碱基顺序分析。     

高温反向顺序测定

单链克隆DNA的反向测序是一个简单和快速的方法,这个方法可利用原来的DNA再进行反向顺序测定,从而达到校正和积累DNA数据的作用。由于反向测序的本质是双链测序,所得到的DNA顺序的图谱背景较深,伴有杂带,或在x光显影上是不清晰的。本文报道利用我们实验室所开发的热稳定性的Bst聚台酶系统,进行反向测序克服了这些缺点,获得的图谱可以和单链DNA模板测序的图谱相媲美。我们以nod D 487-mp 8 ss-DNA为模板进行反向测序,证明Bst聚合酶在65℃反应能得到满意的结果。     

芽孢杆菌中的限制性核酸内切酶

我们从66株国内收集的芽孢杆菌中筛选出10株菌株,它们含有限制性核酸内切酶活力。这些酶已经分别部分纯化并鉴定了其专一性。Bsp211Ⅰ、Bsp226Ⅰ及Bce71Ⅰ是Hae Ⅲ的异源同功酶,识别顺序是,Bsp211Ⅰ的切点如箭头所示。Bsp105Ⅰ、Bsp67Ⅰ、Bsp64Ⅰ、Bsp74Ⅰ及Bsp76Ⅰ和MboⅠ有相同的识别顺序:此顺序中腺嘌呤被甲基化后,Bsp105Ⅰ与MboⅠ一样不能切割,而Bsp67Ⅰ不论此顺序中腺嘌呤是否甲基化均能识别并切断,它们的切点如箭头所示。Bsp63Ⅰ及Bsp78Ⅰ是PstⅠ的异源同功酶,识别顺序是:Bsp63Ⅰ的切点如箭头所示。     

芽孢杆菌中的限制性核酸内切酶

我们从66株国内收集的芽孢杆菌中筛选出10株菌株,它们含有限制性核酸内切酶活力。这些酶已经分别部分纯化并鉴定了其专一性。Bsp211Ⅰ、Bsp226Ⅰ及Bce71Ⅰ是HaeⅢ的异源同功酶,识别顺序是■,Bsp211Ⅰ的切点如箭头所示。Bsp105Ⅰ、Bsp67Ⅰ、Bsp64Ⅰ、Bsp74Ⅰ及Bsp76Ⅰ和MboⅠ有相同的识别顺序:■。此顺序中腺嘌呤被甲基化后,Bsp105Ⅰ与MboⅠ一样不能切割,而Bsp67Ⅰ不论此顺序中腺嘌呤是否甲基化均能识别并切断,它们的切点如箭头所示。Bsp63Ⅰ及Bsp78Ⅰ是PstⅠ的异源同功酶,识别顺序是:■,Bsp63Ⅰ的切点如箭头所示。     

固氮酶结构基因在快生型大豆根瘤菌中的定位

分离纯化了一批我国快生型大豆根癌蘸。测定了它们的固氮酶稀性和寄主专一性,发现相同菌株在不同大豆豆种植株上的结瘤和固氮活性差异甚大。蓑国USDA 191和193似寄主专一性较高,在我们所使用的豆种上结瘤能力很低,固氮活性也不高。对根瘤菌中巨型质粒的数量分布进行了分离分析,表明所有快生型大豆根瘤菌都包含1—3个巨型质粒(分子量范围;30-25Md>。用含有固氮酶结构基因的质粒pSA30作为探针对巨型质粒进行杂交,结果表明即使是快生型大豆根瘤菌,固氮酶结构基因也并不一定定位于巨型质粒上。另外,在若干菌株中发现psA30与二个巨型质粒同时杂交,表明有可能nif HDK或其部分基因的拷贝是分散的。