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本课题组前期首次从谷糠中获得具抗肿瘤活性的过氧化物酶FMBP。为了该蛋白质后期在体外的规模化生产,本研究以谷子cDNA为模板,利用基因工程手段构建了pMal-s-FMBP融合质粒,并优化诱导条件进行原核表达与纯化,最终获得纯度大于90 %的具抗肿瘤活性的重组FMBP（Re-FMBP）。研究发现,Re-FMBP可以逆转HCT-8/5-Fu耐药细胞对5-Fu的耐药性,耐药逆转倍数达到9.6倍。通过Annexin V/碘化丙啶双染色流式细胞仪检测显示：Re-FMBP能够诱导HCT-8/5-Fu耐药细胞发生凋亡;通过罗丹明123染色,流式细胞仪检测结果显示,Re-FMBP处理后,HCT-8/5-Fu耐药细胞内的荧光强度增强。说明Re-FMBP能够增加5-Fu药物在HCT-8/5-Fu耐药细胞内的蓄积。结果揭示,Re-FMBP蛋白可通过抑制耐药细胞增殖,诱导耐药细胞凋亡,抑制耐药细胞对5-Fu药物外排功能来增加HCT-8/5-Fu耐药细胞对5-Fu药物的敏感性。因此,谷糠来源的Re-FMBP蛋白可以作为肿瘤化疗辅助药物来开发。 相似文献
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乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一，严重威胁女性健康。天然产物因其结构多样、毒副作用低及作用机制独特等优势已然成为开发抗肿瘤药物的主要来源。以人乳腺癌细胞MCF-7和小鼠乳腺癌细胞4T1为研究对象，探索植物源多酚类物质阿魏酸(ferulic acid, FA)对乳腺癌细胞的影响。细胞存活实验和克隆形成实验表明，阿魏酸可以抑制MCF-7和4T1细胞的存活和增殖，且抑制效应具有浓度依赖性。通过Pull-down、银染和LC-MS-MS质谱鉴定分析发现，FA与蛋白质吡咯啉-5-羧酸还原酶1(pyrroline-5-carboxylate reductase 1,PYCR1)有直接相互作用。PYCR1体内能通过酶促反应催化脯氨酸代谢合成，发挥促进肿瘤生长和增殖的作用。使用Autodock Vina和PyMOL软件模拟分子对接，结果显示，FA与PYCR1的246位谷氨酸和251位精氨酸存在相互作用；通过酶活力检测证实，FA靶向结合PYCR1且以浓度依赖性的方式抑制其酶活性；通过分析人类肿瘤基因图谱(TCGA)发现，PYCR1在乳腺癌患者中的表达显著高于健康对照人群(P<0.0001),且高表达的... 相似文献
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结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤。目前，结肠癌早期诊断和靶向治疗仍存在不足，使其发病率占所有恶性肿瘤第3位，死亡率位于第5位，给人类的健康带来巨大的威胁。及早发现结肠癌治疗的新靶点对其预后至关重要。已有研究揭示，微RNA-149(miR-149)在结肠癌患者中低表达与结肠癌的不良预后呈正相关，但其在结肠癌发生发展过程中的作用机制有待阐明。基于此，本研究首先通过MTT和集落形成结果发现，miR-149对结肠癌HT-29细胞的增殖具有显著的抑制作用(P<0.05)。线粒体荧光标记及Western免疫印迹结果表明，miR-149通过促进线粒体融合蛋白2 (mitofusin2,MFN2)的表达，抑制线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein1,DRP1)和线粒体分裂蛋白1(mitochondrial fission protein1,FIS1)的表达，进而诱导了结肠癌HT-29细胞线粒体的融合(P<0.05)。此外，通过细胞线粒体膜电位检测和蛋白质免疫印迹分析线粒体的功能状态结果显示，miR-149可以促使线粒体膜电位水平降低(P<0.05)。进一步通... 相似文献
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