表观遗传修饰对肝纤维化调控作用的研究进展

肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)是由各种致病因子所引起的肝脏持续炎症反应和纤维结缔组织异常增生的过程,是肝硬化和肝癌发展的必经阶段。近年来,越来越多的研究发现表观遗传修饰通过改变DNA甲基化、组蛋白修饰及非编码RNA (non-coding RNA, ncRNA)表达等,在不改变核酸序列的前提下,对肝内实质细胞和非实质细胞的重要信号转导通路、细胞因子和趋化因子的表达等进行调控,进而影响肝纤维化的发生发展。该文就表观遗传修饰在肝纤维化中的调控作用进行综述。     

环境影响评价的尺度约束性及技术框架

尺度约束是地表复杂系统的基本规律,环评尺度约束常隐存于主观经验或零存于环评导则中,环评尺度约束较少被明确关注。讨论了环境影响尺度约束、环评尺度约束和环评技术框架尺度约束。研究发现,环境影响的尺度约束性内在原因在于环境影响主体、客体和影响内容存在等级结构;环评受空间、时间和分析三类尺度约束,空间尺度约束体现于空间范围和空间信息分辨率对环评影响,时间尺度约束体现于环评的时长和时频,分析尺度约束表现为环评技术方法和环境影响主观认知水平对评价的影响,三类尺度约束同时贯穿于环评过程,任何环评都可以在三类尺度空间中定位;环评技术框架的关键环节都受空间、时间和分析尺度约束,且以环境影响主体的空间、时间尺度为核心,具有一定弹性,一般空间或时间范围先放大再缩小、分辨率由粗到细。     

HBx-EGFP-TLM融合蛋白表达载体的构建、蛋白表达纯化及活性检测

乙型肝炎病毒X蛋白 (HBx) 具有广泛的转录激活作用,但是由于细胞类型和实验条件的差异,外源启动子介导的HBx瞬时表达水平常表现出不均一性,为其功能的研究带来困难。为了解决HBx研究过程中遇到的这些难题,利用PCR扩增获得HBx及含转导肽TLM的EGFP编码序列,经酶切后插入pGEX-4T-1原核表达载体,成功构建重组质粒pGEX-HBx-EGFP-TLM和pGEX-EGFP-TLM。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3) 感受态细胞,融合蛋白经IPTG诱导表达,采用?KTATM Purifier 蛋白纯化系统纯化并进行SDS-PAGE和Western blotting分析,确定为目的蛋白。将纯化后的融合蛋白分别与AML12和SMMC-7721细胞共孵育,Western blotting和激光共聚焦显微镜检测证实TLM转导肽能够介导HBx-EGFP和EGFP进入细胞,同时进入细胞的HBx-EGFP-TLM能够发挥转录激活活性,为HBx功能的深入研究奠定了基础。     

AICAR通过激活Foxc1信号来调节小鼠F9细胞的增殖

为了探索5-氨基咪唑-4-氨甲酰核糖核苷（AICAR）抑制小鼠F9 细胞（F9 embryonal carcinoma cells）增殖的作用机制,本文构建了Foxc1的慢病毒真核表达载体,通过实时定量PCR、免疫荧光染色、双荧光素酶报告基因检测系统以及细胞增殖检测试验,探索AICAR抑制小鼠F9细胞的增殖作用机制. 结果发现,AICAR可以在RNA和蛋白水平促进Foxc1的基因表达,并可以作用于核转录因子κB通路. 另外在培养液中添加AICAR或过表达Foxc1都能抑制F9细胞的增殖. 信号通路报告载体检测发现Foxc1可以激活核转录因子κB通路以及细胞周期相关的通路. 总之,本研究证明,AICAR 通过激活Foxc1通路及其下游多条信号通路来抑制F9细胞增殖.