受体介导的基因转移技术

通过受体对DNA-配体复合物的特异识别和内吞, 可以将外源基因导入特定的细胞内进行表达,称为受体介导的基因转移技术. 对该项技术的基本方法、体内外应用研究进展以及发展方向等进行了介绍和综述.     

肝靶向配体半乳糖基白蛋白和多聚谷氨酸

化学合成两类去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的人工配体——半乳糖基白蛋白(Gal_nHSA)和半乳糖基多聚-L-谷氨酸(Gal_nPLGA), 并以 ¹²⁵I标记的去唾液酸胎球蛋白(ASF)为标准配体,测定了合成配体抑制 ¹²⁵I-ASF与大鼠肝细胞膜ASGPR结合的IC₅₀值. 结果表明,Gal₁₂HSA、Gal₁₅HSA、Gal₂₆HSA、Gal₃₀HSA和Gal₃₄PLGA均能够有效地抑制 ¹²⁵I-ASF与ASGPR的结合,且前者与ASGPR的亲和力随半乳糖基化程度的增加而增加. 这些合成配体来源丰富、制备简单,适合于作为药物或基因肝靶向运送的导向配体.     

不同入肝血流阻断方式对荷瘤小鼠肝功能影响的实验研究

目的:探讨不同血流阻断方式对荷瘤小鼠肝细胞功能的影响。方法:选择昆明小鼠24只随机分为三组,正常对照组(Suspe-nded operation,SO)、肝门阻断组(Occlusion of the portal triad,OPT)、保留肝动脉持续阻断门静脉(Occlusion of portal vein,OPV)各8只。采用门静脉注射肿瘤的方法建立肝癌模型,建模后3天采用阻断范围为左外叶和中叶、阻断时间为60分钟的入肝血流阻断方式,复流后5天后,通过测量3组对肝脏的缺血再灌注损伤程度以及病理学变化来评价不同血流阻断方式对肝细胞功能影响的程度。结果:门静脉注射小鼠肝癌细胞8天后,对照组测量小鼠正常丙氨酸氨基转移酶(ALT)值为66.5±22.3 IU/L,OPT组值为276.3±80.5 IU/L,OPV组值为89.6±28.4 IU/L,两组比较有统计学差异(P0.01);对照组测量小鼠正常天冬氨酸氨基转移酶(AST)值为301.3±126.7 IU/L,OPT组值为1126.4±285.5 IU/L,OPV组值为438.6±150.7 IU/L,两组比较有统计学差异(P0.01),病理组织学OPV组肝细胞损伤程度明显较OPT组轻。结论:保留肝动脉持续阻断门静脉可以减轻荷瘤小鼠肝脏的缺血再灌注损伤。     

肝移植术后早期暂时性停用CSA或FK506的个体化治疗体会

目的:总结肝移植术后早期根据不同的个体及不同的病情采用个体化免疫抑制剂治疗的经验.方法:除术后早期3例因非排斥反应原因死亡外,回顾性分析39例肝移植患者术后早期3个月内有停用免疫抑制剂3天以上者与无停用免疫抑制剂者的排斥反应发生及预后情况,即不同个体在不同病情采用不同免疫抑制方法的效果.结果:39例受体中共有16例成功停用CSA或FK506平均5.6天,与24例未停药组比较,两组病人一般特征无差异,但ASA评分呈显著差异,两组排斥反应及其他并发症无明显差异(P=0.23).随访2-6年,术后随访平均3年存活的19例中,最低CSA用量为2 mg/kg/d,最低FK506为0.02 mg/kg/d,一般FK506用量为0.04-0.06 mg/kg/d.结论:对于术后早期合并肾功能不全、严重感染、药物中毒等受体载时性停用CSA或FK506有利于受体的恢复,早期治疗中应根据受体免疫状态、术后不同时期、合并的特殊病情及对各种免疫抑制剂的个体差异等来决定免疫抑制剂使用方案及用量,有效控制排斥反应、毒副作用及相关并发症,提高移植肝存活率.     

军团菌核酸检测方法研究进展

本文综述了以核酸为基础的核酸探针杂交和多聚酶链反应（ＰＣＲ）在军团菌检测方面的应用,特别是ＰＣＲ与核酸探针联用检测环境水样中的军团菌具有高度的敏感性和特异性,并对其应用于临床的前景作了探讨。     

去唾液酸糖蛋白受体和脂质素协同介导原代大鼠肝细胞基因转移

以阳离子脂质素作为DNA运载体 ,以肝细胞去唾液酸糖蛋白受体 (ASGPR)的天然配体去唾液酸胎球蛋白 (ASF)作为导向配体 ,用于介导原代大鼠肝细胞基因转移 .结果表明转染复合物中加入ASF可明显提高肝细胞转染率 ,并且明显降低高比例脂质素 DNA复合物转染细胞时对细胞的毒性作用 ,ASGPR的化学合成配体半乳糖基白蛋白在基因转移中亦与ASF具有同样的作用 .因此ASGPR可与阳离子脂质素协同介导肝细胞基因转移 ,为原代肝细胞基因转移提供了一种更为简便、实用、有效的方法 ,有应用于肝基因治疗的前景 .     

基因治疗研究中脂质体介导的基因转移技术

对于脂质体的深入研究特别是阳离子脂质体的研制使其逐步成为重要的基因转移载体之一,并且初步应用于基因治疗研究,同时多种靶向脂质体的研制也为体内靶向基因转移和表达奠定了基础。本文就脂质体的结构、功能、在基因治疗研究中的应用以及各种靶向脂质体的研制进行了介绍。     

Asialoglycoprotein receptor and liposome synergistically mediate the gene transfer into primary rat hepatocytes

Gene transfer into primary rat hepatocytes was performed by employing cationic liposome as DNA carrier and the specific ligand of hepatic asialoglycoprotein receptor (ASGPR), asialofetuin, as liver-targeting ligand. The resuits showed that asialofetuin, when added to the gene transfer complexes, could significantly increase the hepatocyte transfeetion efficiency, and alleviate the cellular toxicity of Lipofectin. Several synthetic ligands of ASGPR (galactosyl albumin) could also increase the transfection efficiency of hepatocyte like asialofetuin. It was proved that ASGPR and cationic liposome could synergistically mediate the gene transfer into primary rat hepatoeytes. This novel gene delivery system provided a safer, more simple and efficient gene transfer method for primary hepatocytes, and showed prospecting application in hepatic gene therapy.     

克拉玛依油田高盐采油废水人工湿地环境及其生态效应

作为生态系统中较为脆弱的一种,荒漠区生物种类具有显著的地域特征,高盐采油废水的排放会对荒漠生态系统造成一定的影响。以克拉玛依油田某外排水人工湿地为研究对象,采用等距离布点原则布设12个样方,通过地理探测器和聚类分析识别出湿地影响区域和背景区域,分析了两区域内土壤理化性质、植物多样性,并分析了盐分生态风险评估。结果表明：采油废水排放对周围土壤含水率影响较大,背景点位含水率在6.5%以下,湿地影响点位含水率在12%-30%;对土壤全盐量的影响不显著,土壤含盐量呈现从西北到东南方向递增的规律;在整个研究区域发现8个物种,其中4个物种在两区域内都存在,但是植物生长状况差异明显,受湿地影响区域的植被盖度变化范围更大,在1%-40%之间,未受影响区域的植被盖度均在20%以下;通过毒性效应分析得到盐分的预测无效应浓度为83.04 g/kg,实际浓度与其相比,风险熵小于1,盐分的暴露尚未引起生态风险。     

胆囊结石患者血清microRNA表达谱及其意义

目的:建立胆囊结石患者与健康人的血清microRNA(miRNA)表达谱,并分析其差异miRNA功能。方法:收集解放军总医院诊治的胆囊结石患者的血清(试验组)及健康人的血清(对照组),采用miRNA测序技术,建立胆囊结石患者的miRNA表达谱,并通过qPCR技术验证其差异miRNA,利用生物信息学技术预测其差异miRNA的生物功能。定量资料以x±s描述,两组数据间比较采用t检验。结果:试验组与对照组miRNA表达谱序列分别为14 899 245和11 783 121个,miRNA种类分别为686和633个,其差异表达miRNA为16个,均为下调。GO分析显示差异miRNA的靶基因在细胞过程上富集于细胞转化、生物调节和代谢过程等,在细胞组成上富集于细胞成分和细胞器成分等,在分子功能上富集于结合和活性催化等;KEGG功能分析显示差异miRNA的靶基因主要参与环腺苷酸、催产素、生物节律等代谢通路。利用qPCR方法验证miR-1228、miR-1249、miR-3614和miR-766在2组间差异趋势与测序结果基本一致,其中miR-1228、miR-3614和miR-766在2组间存在统计学差异,而miR-1249无统计学差异。结论:血清中的差异miRNA在胆囊结石的形成中可能发挥重要作用,其对胆囊结石疾病的防治具有重要意义。