GST pull-down联合质谱鉴定BAG结构域相互作用蛋白

目的:BAG结构域(BAG domain,BD)为BAG家族蛋白的基本功能结构域,通过对BAG家族蛋白6个成员的9个BDs的相互作用蛋白进行分析,以探明不同BD相互作用蛋白的异同点并为研究BAG家族蛋白多样性生物功能的分子机制提供理论依据。方法:构建p-GEX-4T2-BDs重组子并转化E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导表达GST-BDs融合蛋白并纯化。采用GST pulldown技术联合高效液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)的策略对BDs相互作用蛋白进行定性定量分析。最后,用DAVID(The Database for Annotation,Visualization and Intergrated Discovery)和cytoscape对BDs相互作用蛋白进行GO(Gene Ontology)功能分析及KEGG(Kyoto Enyoolpedia of Genes and Genomes)通路分析。结果:在Hela细胞的胞浆蛋白中总共鉴定到370个潜在的BDs相互作用蛋白,主要为核糖体蛋白(ribosomal proteins)、翻译起始因子(Eukaryotic translation initiation factors)、翻译延长因子(Eukaryotic translation elongation factors)、泛素化-蛋白酶体相关蛋白(ubiquitin-proteasome associated proteins)及HSP40家族蛋白。GO功能富集分析结果显示,BDs相互作用蛋白涉及多种生物学功能,包括细胞内蛋白质质量控制(protein quality control)、糖代谢(glycolysis)、免疫调控(immune response)、应激反应(stress response)、细胞周期(cell cycle)等。KEGG通路分析结果表明BDs相互作用蛋白参与多条细胞内重要的信号通路,包括FGF信号通路(FGF signaling pathway)、EGF受体信号通路(EGF receptor signaling pathway)、PDGF信号通路(PDGF signaling pathway)、Ras通路(Ras pathway)等。结论:BAG家族蛋白不同成员的BD所介导的蛋白-蛋白相互作用既有共性又有特异性,BAG家族蛋白通过BDs介导多种蛋白相互作用并参与细胞内多条重要的信号通路来调控细胞内蛋白质稳态、糖代谢、免疫反应、应激反应、细胞周期等过程。     

节律性转录因子驱动哺乳动物昼夜节律生物钟简

生物体通过内在的昼夜节律生物钟调整生理行为和代谢生化反应来适应昼夜环境周期性变化。哺乳动物的昼夜节律生物钟核心连锁环通过驱动特异性的转录因子来维持整个基因组转录的节律性。生物钟与代谢的内稳态密切相关,生物钟的紊乱会引起各种疾病,该领域的研究能够促进时间疗法的发展来维持生命的健康,甚至可以延缓衰老。     

一种溶菌酶样蛋白对肺炎链球菌毒力及荚膜多糖合成的影响

摘要：【目的】为了研究肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae, S.pn）的一种假想的溶菌酶样蛋白在细菌生物学性状及其致病中的作用。【方法】利用长臂同源PCR对该基因进行敲出,并同时构建带有拯救质粒的缺失菌株,观察D39野生菌、缺失菌与带有拯救质粒的缺失菌株在相关生物学性状及其致病力改变,从而鉴定这种假想溶菌酶样蛋白的功能。【结果】缺失菌与野生菌相比,细菌生长减缓,毒力下降,荚膜多糖合成明显减少。而将拯救质粒转入缺失菌株后,该溶菌酶样蛋白的mRNA表达水平较野生菌高,其毒力及荚膜合成     

四氯化碳诱导小鼠肝脏纤维化的差异蛋白质组学

以四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCl4)诱导小鼠肝组织纤维化为研究模型,发现并探讨纤维化肝组织与正常肝组织在蛋白质组水平上的差异。实验小鼠(C57 BL/6)随机分为两组,由橄榄油和四氯化碳诱导15周,并分别对这两组肝组织的全蛋白表达谱进行质谱检测,应用GO(Gene Ontology)功能分类分析和KEGG(Kyoto Enyoolpedia of Genes and Genomes)信号通路的富集分析方法对鉴定到的全蛋白表达谱进行差异表达分析。在对照组和实验组中,我们分别鉴定到17 382和20 486条特异性肽段,图谱平均利用率大于50%,共计鉴定到蛋白4 991种(蛋白特异性肽段个数至少为1),其中差异表达蛋白有2 135种(差异倍数大于或等于2),表达上调蛋白1 264种,下调蛋白871种。纤维化肝脏组织中与细胞外基质组成(Extracellular matrix organization)、细胞骨架组成(Cytoskeleton organization)、有机磷酸代谢(Organophosphate metabolic process)、细胞定位(Cellular localization)和细胞组分调节(Regulation of cellular component organization)相关蛋白的表达是上调的;另外,与小分子代谢(Small molecule metabolic process)、蛋白质转运(Protein transport)和有机氮化合物的代谢(Organonitrogen compound metabolic process),以及四吡咯的合成过程(Tetrapyrrole biosynthetic process)有关蛋白的表达是下调的。信号通路富集分析结果表明,纤维化与VEGF和T细胞受体信号调节通路密切相关。结果提示,纤维化的形成不仅是一个复杂的信号转导过程,更是一个炎症与免疫相互促成的结果;增强肝实质细胞的存活,降低相关信号的传递及接收都有可能对纤维化的发生和发展起到抑制效果。