紫外线b促进绵羊黑色素细胞中GPNMB和PMEL的表达

非转移性黑色素瘤糖蛋白b（glycoprotein non-metastatic melanoma protein b,GPNMB）及其同系物色素细胞特异性黑色素细胞蛋白（pigment cell-specific melanocyte protein,PMEL）对黑素体的形成和黑色素的生成具有重要的作用,而GPNMB和PMEL的功能还有待深入研究。本文旨在探索GPNMB和PMEL在不同毛色绵羊皮肤表达是否存在差异,确定紫外线b（UVB）对GPNMB和PMEL是否有影响。免疫组织化学结果表明,GPNMB在不同毛色绵羊皮肤的毛基质、内外毛根鞘、毛乳头等区域均有表达。Western印迹和qRT-PCR结果显示,黑色绵羊皮肤中GPNMB和PMEL表达量,高于白色绵羊皮肤。黑色素细胞经UVB照射后,GPNMB和PMEL的表达增高。UVB照射剂量为100 mJ/cm2时,黑色素细胞活性最高;单次UVB辐射后,GPNMB和PMEL mRNA表达量在72 h达到顶峰,两者的曲线变化趋势大致相同。UVB连续辐射后,GPNMB mRNA表达量在4 d达到顶峰,而PMEL mRNA表达量虽然在3 d升高,但且对GPNMB作用更明显。上述结果提示,GPNMB和PMEL在不同毛色绵羊皮肤存在差异性表达。UVB单次或者连续照射,均促进GPNMB和PMEL表达,且对GPNMB影响更显著。GPNMB和PMEL可能通过影响黑素体的成熟进而调节黑色素的生成。     

Lpa-miR-nov-66拮抗IGF1促羊驼黑色素细胞黑色素生成及细胞迁移作用

胰岛素样生长因子1（IGF1）能够促进细胞迁移。我们最近的研究发现,一种新发现的miRNA（lpa-miR-nov-66）可通过靶向抑制可溶性腺苷酸环化酶（soluble guanylate cyclase,sGC）抑制黑色素细胞产生黑色素。然而,当二者联合作用于黑色素细胞时,究竟如何影响黑色素细胞的黑色素产生及细胞迁移尚未见报道。本研究证明,lpa-miR-nov-66可拮抗IGF1的促黑色素细胞的黑色素生成及促细胞迁移作用。ELISA法检测结果揭示,与单纯IGF1处理比较,过表达lpa-miR-nov-66或过表达lpa-miR-nov-66联合IGF1处理可明显降低IGF1诱导羊驼黑色素细胞的cAMP生成水平。实时定量PCR和Western印迹证明,与单纯IGF1处理比较,过表达lpa-miR-nov-66或联合处理可明显降低毛色生成相关基因--MITF、TYR、和TYRP1在黑色素细胞的表达。此外,细胞增殖和细胞划痕实验显示,与单纯IGF1处理比较,过表达lpa-miR-nov-66或联合处理可显著抑制黑色素细胞的迁移。上述结果表明,lpa-miR-nov-66可以减少cAMP产生,抑制IGF1的促黑色素细胞产生黑色素的作用,并抑制IGF1对黑色素细胞增殖和迁移的促进作用。     

人类细胞培养和染色体标本制作中几个值得注意的问题

目前,国内大多数开展人类细胞培养和染色体标本制作的实验室已有了一套比较固定的方法,但是少数刚开始工作的实验室常常会碰到这样或那样的问题。本文就有关问题作些分析,并提出一些解决问题的措施。 1.染色体分裂相少这种情况是大多数刚开展这项工作的实验室最常见的问题,是由于培养基的质量所引起的。在人血细胞培养中所用的培养基通常由三种主要成分组成:一种是血清;一种是综合人工营养液;另一种是PHA(植物凝血素)。PHA可在配制培养基时加入其内,也可临时按比例     

产前经腹灰阶联合彩色血流超声多参数对胎盘植入性疾病的诊断效能研究

摘要 目的：探究产前经腹灰阶联合彩色血流超声多参数对胎盘植入性疾病的诊断效能。方法：2019年11月-2021年12月于我院收治的产前超声诊断为前置胎盘的孕妇共计62例,其中44例超声诊断合并了胎盘植入的孕妇。所有孕妇产前均进行经腹灰阶检查、经腹彩色超声检查和二者联合检查胎盘植入性疾病,通过分析胎盘植入性疾病筛查结果,评价产前超声经腹灰阶联合彩色血流超声多参数对胎盘植入性疾病的筛查效能。结果：（1）通过灰阶超声诊断检出胎盘植入的灵敏度为73.42 %,特异度为86.54 %;（2）通过彩色超声诊断检出胎盘植入的灵敏度为76.89%,特异度为89.07 %;（3）经腹灰阶联合彩色血流超声多参数诊断检出胎盘植入的灵敏度为87.79 %,特异度为90.36 %;（4）经腹灰阶检查、经腹彩色超声检查和二者联合检查对胎盘植入性疾病筛查阳性率分别为56.45 %、62.90 %和67.74 %,二者联合检查对产前胎盘植入性疾病筛查阳性率显著高于经腹灰阶检查和经腹彩色超声检查（P<0.05）。（5）二者联合检查的敏感度为72.26 %,特异度为90.54 %,阳性比为95.55 %,诊断比值比为78.89 %。结论：产前经腹灰阶联合彩色血流超声多参数对胎盘植入性疾病的诊断有较高的灵敏度和特异度,值得临床推广应用。     

miR-411a-3p抑制羊驼黑色素细胞黑色素的生成

microRNA-411a-3p（miR-411a-3p）在不同毛色羊驼皮肤中差异表达,提示其可能在毛色形成中起调控作用。为证明miR-411a-3p在羊驼皮毛黑色素形成中的作用,本研究通过生物信息学预测及靶基因搜索,发现胰岛素样生长因子1受体（IGF1R）是miR-411a-3p的靶基因,继而构建了含Igf1r mRNA 3′-UTR的荧光素酶报告基因载体。报告基因转染结合报告酶活性测定证明,Igf1r是miR-411a-3p的靶基因。原位杂交显示,miR-411a-3p主要在羊驼黑色素细胞胞质中表达,提示其可能在黑色素细胞中具有重要作用。qRT-PCR揭示,棕色和黑色羊驼皮肤中miR-411a-3p表达量明显低于白色羊驼。qRT-PCR联合蛋白质印迹分析显示,在羊驼黑色素细胞过表达miR-411a-3p,伴随Igf1r下调,小眼畸形相关转录因子（Mitf）依赖的毛色基因酪氨酸酶（Tyr）、酪氨酸酶相关蛋白-2（Tyrp2）及黑色素表达水平明显下调。上述结果提示,miR-411a-3p可通过靶向抑制Igf1r负调控羊驼黑色素黑色素合成。该结果将加深我们对羊驼毛色形成机制的认识。     

超声多参数在预测妊娠期糖尿病巨大儿分娩方式中的临床价值

摘要 目的：探究超声多参数在预测妊娠期糖尿病巨大儿分娩方式中的应用价值。方法：选择2016年2月至2020年9月于中国人民解放军联勤保障部队第九○一医院（我院）分娩的156例妊娠期糖尿病产妇为研究对象,回顾性分析其一般临床指标及多普勒超声检测参数,按照新生儿是否为巨大儿区分为巨大儿组（52例）和非巨大儿组（104例）,对比两组胎儿超声参数差异,评估胎儿双顶径（biparietal diameter,BPD）、头围（head circumference,HC）、腹围（abdominal circumference,AC）及股骨长度（femur length,FL）与新生儿体重的相关性,纳入年龄、宫高、孕妇腹围、孕妇体重、BPD、HC、AC、FL等指标评估巨大儿单因素影响因素,最后多因素Logistic回归分析探究巨大儿独立危险因素。结果：（1）比较显示巨大儿组胎儿BPD、HC、AC和HL均大于非巨大儿组（P<0.05）;（2）Spearman相关性分析显示BPD、HC、AC和HL均与新生儿体重呈正相关（P<0.05）;（3）分析显示产妇宫高、产妇腹围、孕期增重、BPD、HC、AC和HL均为巨大儿单因素影响因素（P<0.05）;（4）Logistic多因素回归分析显示孕妇宫高、BPD、HC、AC为巨大儿独立危险因素。结论：孕期使用超声多参数对妊娠期糖尿病产妇巨大儿发生情况具有较好的预测价值,可协助医师了解胎儿相关指标,并据此选择合适的分娩方式,值得临床推广应用。     

酵母双杂交筛选与GsCBRLK相互作用的蛋白质

GsCBRLK(calcium/calmodulin-binding receptor-like kinase from Glycine soja)在ABA及盐胁迫诱导的钙离子信号通路中起到关键的调节作用。为深入研究GsCBRLK蛋白的作用机制, 文章采用膜酵母双杂交系统, 以GsCBRLK为诱饵蛋白, 筛选与其相互作用的蛋白质。通过构建野生大豆盐胁迫条件下的cDNA文库、膜酵母双杂交系统筛选、复筛、回转验证、生物信息学分析以及酵母体内互作验证等手段, 最终获得2个(SNARE 和 14-3-3 蛋白)与GsCBRLK诱饵蛋白相互作用的蛋白质。     

IGF1和IGF1R在小鼠第一个毛囊生长周期皮肤的表达

毛囊生长周期中,真皮乳头和毛基质间的基质 上皮信号调控细胞的增殖和分化。多功能细胞调控因子胰岛素样生长因子1（IGF1)是该信号路径的成员之一。第1个毛囊生长周期决定着毛囊的正常生长和发育,但IGF1在此期的作用未见报道。实时荧光定量PCR结果显示,IGF1在生长期皮肤中的相对表达量最低,在退化期表达量最高,在静止期表达量又降低。与生长初期相比,IGF1在退化期和静止期的表达量呈差异极显著（P＜0.01）;胰岛素样生长因子1受体（IGF1R）在生长期皮肤中的相对表达量最高,在退化期表达量最低,而在静止期表达量又升高。与生长初期相比,IGF1R在退化期和静止期的表达量呈差异极显著（P＜0.01）。Western 印迹结果显示,IGF1和IGF1R蛋白在小鼠皮肤第1个毛囊生长周期各阶段的表达趋势分别与其mRNA的表达趋势一致;免疫组织化学结果表明,IGF1主要分布在小鼠表皮,而IGF1R免疫阳性在小鼠毛囊毛球部、内外根鞘和毛乳头均有分布。以上实验结果揭示,IGF1和IGF1R在小鼠皮肤第1个毛囊生长周期的各阶段的差异性表达,可能在毛囊生长周期各阶段的转化过程中参与了黑色素的形成。然而,IGF1和IGF1R表达趋势不一致,提示IGF1在小鼠皮肤中发挥作用时,并非只与IGF1R结合才能发挥作用。     

评估VITEK2-COMPACT GN13与纸片扩散法测定粘质沙雷菌对亚胺培南药敏结果的可靠性研究

目的评估法国生物梅里埃VITEK2-COMPACT GN13药敏系统(VITEK2法)和纸片扩散法(K-B法)检测粘质沙雷菌对亚胺培南药敏结果的可靠性。方法本研究选取了50株金华市中心医院2014年6月至11月临床标本中分离出的非重复的粘质沙雷菌,分别采用VITEK2法、K-B法和微量肉汤稀释法测定其对亚胺培南的体外敏感性,以微量肉汤稀释法作为参考方法,评估VITEK2法、纸片扩散法与参考方法的分类一致率(CA%)。结果K-B法与参考方法的一致率为94.0%(47/50),仅有6.0%的小错误(MIE),未出现大错误(ME)和极大错误(VME);而VITEK2法与参考方法的一致率仅为48.0%(24/50),其中VITEK2法测定为敏感的菌株与参考方法的一致率达95.6%,但VITEK2法测定为耐药或中介的菌株与参考方法的一致率仅为7.4%,小错误率(MIE%)和大错误率(ME%)分别为55.6%和37.0%,未出现极大错误(VME)。结论 K-B法检测粘质沙雷菌对亚胺培南的药敏结果是比较可靠的;VITEK2法检测粘质沙雷菌对亚胺培南敏感的结果也是可靠的,但对亚胺培南非敏感结果的错误率(ME+MIE)高达到92.6%,实验室日常工作中若发现此类结果应采用K-B法或微量肉汤稀释法重新复核。     

miR-380调控羊驼黑色素细胞MAPK/ERK信号通路

miR-380是不同羊驼毛色中差异表达的基因之一,但是否与黑色素生成有关未见报道。为了丰富调控黑色素生成的机制,挖掘黑色素生成路径中所涉及到的更多新的基因并揭示miR 380在黑色素细胞中的功能,本实验通过生物信息学方法预测出MAPK信号通路的成员MAP3K6是miR-380的靶基因之一。在293T细胞中共转染miR-380和MAP3K6后,与对照组相比双荧光报告酶活性下降（28.92 ± 25.63）%(P<0.01) ,下降趋势明显,说明MAP3K6可能是miR-380的靶基因之一;在羊驼黑色素细胞中转染miR-380后,MAP3K6、MEK1、ERK1/2、CREB和MITF在转录水平的表达量与NC组相比具有显著下降趋势,其中CREB下降趋势尤为显著（64.20 ± 54.30）%（P<0.01）,Western印迹检测MAP3K6、p-MEK1、p-ERK1/2、CREB和MITF在蛋白质水平的表达与NC组相比下降趋势明显且p-MEK1和CREB基因下降极为显著,分别为（29.09 ± 10.68）%（P<0.001）和（47.12 ± 6.70）%（P<0.001）,抑制组则反之。通过 Masson-Fontana黑色素颗粒染色法检测miR-380抑制黑色素细胞产生黑色素颗粒,用紫外分光度法检测真黑素（eumelanin,EM）和褐黑素（pheomelanin,PM）,含量结果提示EM与PM含量分别下降为（38.63 ± 2.00）%（P<0.01）,（54.10 ± 5.73）%（P<0.001）且PM含量下降极为显著。综上所述miR-380通过靶向抑制MAP3K6等基因的表达,从而对MAPK/ERK信号通路起调控作用,最终影响黑色素生成生物学功能,此研究对哺乳动物毛色形成机制和防止皮肤受紫外辐射有重要意义。