一种制备鱼类染色体的新方法

自1966年Ojima建立鱼类染色体空气干燥法以来,鱼类染色体研究技术有了很大进展.目前有肾细胞培养法、上皮细胞培养法和外周血培养法等。细胞培养需要在有一定条件的实验室进行(如无菌操作),因而简便快速的制备鱼类染色体方法便不断产生,有PHA+秋水仙碱注射法、秋水仙碱体外注射法和CoCl+秋水仙碱体外注射等方法.本文介绍一种适合于在野外条件下进行的小型鱼类和鱼苗染色体制片方法。     

人类和哺乳类细胞遗传学发展的转折（续）

五、四季豆与细胞遗传学 细胞培养用于染色体研究需要丰富的经验和较大的耗费。假如仅仅为了研究染色体而筹备一套细胞培养的设备,对许多实验室而言是不现实的;此外,除非碰上外科手术,否则从正常人体很难取得活检标本(诸如皮肤组织等)。要是能取少量外周血液用于染色体分析岂不更为方便！在美国的宾夕法尼亚大学任教的病理学家彼德·诺威尔(Peter Nowell),在1960年进行人体白细胞培养时得到了一种意外的发现:在培     

双壳贝类染色体标本制备技术的优化

本研究以牡蛎、咬齿牡蛎鳃细胞为材料,采用PHA处理法、低温同步化法及活体去壳法进行预处理,制作成染色体标本;以马氏珠母贝、企鹅珍珠贝担轮幼虫为材料,采用PHA促繁殖获取胚胎法,制作胚胎染色体标本.对不同时间不同处理方式获得牡蛎染色体分裂相比例、PHA促繁殖获取胚胎法获得马氏珠母贝染色体分裂相比例进行统计.结果发现,PHA处理法在24 h时能获取最多分裂相(3.50‰),低温同步化法在72 h时能获得最多分裂相(2.20‰),活体去壳法始终保持较高分裂相比例(3.60‰),PHA促繁殖获取胚胎法获得最大分裂相比例(10.00‰).4种方法都能获得理想的中期分裂相数目.其中,低温同步化法缺点是温度难控制、预处理时间长;活体去壳法易导致贝类死亡;PHA促受精获取胚胎法缺点是胚胎的获取受繁殖季节限制.PHA处理法预处理时间短、获取分裂相数目多,无疑是贝类成体染色体制备的最好的方法.同时,PHA也为贝类人工繁殖提供了一种更为有效的手段.     

鱼类染色体的白细胞-PHA活体内处理制片及其组型观察

目前,鱼类染色体标本制备的方法主要是由Yamamoto等建立的肾细胞-PHA体外短期培养法和Ojima等提出的外周血淋巴细胞离体培养法,以及活体注射PHA直接用肾组织的细胞制片等。用短期细胞培养研究鱼类染色体有较突出的优点,它能保持染色体的自然状态,染色体的形态特征较易于显示出来,中     

利用猪皮凝胶进行3D细胞培养

<正>组织细胞在培养基通常是平面生长。为了更好的模拟真实的生物组织,了解细胞之间的相互关系,多年来很多实验室开展了3D细胞培养技术研发。而一些3D培养的细胞已经用于药物筛选和组织再生等方面。本研究则以猪皮为材料制作培养基,利用它富含细胞生长的营养和支持结构以及它的溶胶与凝胶的特点实施3D细胞培养。猪皮凝胶的基本制作方法如下:新鲜猪皮洗净后,在开水中煮沸5min,使皮肤与皮下组织脂肪之间的     

大熊猫染色体腹复制带研究

以培养的大熊猫外周血淋巴细胞为实验材料,在细胞培养终止前４ｈ加入ＢｒｄＵ（终浓度为１０μｇ／ｍｌ培养基）,对复制的染色体ＤＮＡ进行ＢｒｄＵ标记。掺入ＢｒｄＵ的染以体吖啶橙（０．０５％）处理、紫外光照射、Ｇｉｅｍｓａ染色后,可在染色体上获得清晰的复制带纹。根据众多分裂相所显示的不同复制带型,可初步确定大熊猫每一染色体独特的晚复制带纹。在雌性个体的两个Ｘ染色体中,一条Ｘ染色体复制明显落后于另一Ｘ染色体     

林麝染色体制备方法及核型与G-带带型研究

以林麝外周血淋巴细胞为实验材料,在培养基中加入植物血球凝集素PHA和伴刀豆球蛋白ConA,由此建立了适合其增殖的培养体系。培养75h后,用空气干燥法制备染色体,确定林麝核型是2N=58,且全都是端着丝粒染色体。实验结果还表明,通过获得较晚的中期分裂相,可以确定染色体是端着丝粒不是亚端着丝粒类型。同时首次应用染色体G-带技术,研究了林麝染色体的G-带带型。     

大熊猫染色体晚复制带研究

以培养的大熊猫外周血淋巴细胞为实验材料,在细胞培养终止前４ｈ加入ＢｒｄＵ（终浓度为１０μｇ／ｍｌ培养基）,对复制的染色体ＤＮＡ进行ＢｒｄＵ标记。掺入ＢｒｄＵ的染色体经吖啶橙（０．０５％）处理、紫外光照射、Ｇｉｅｍｓａ染色后,可在染色体上获得清晰的复制带纹。根据众多分裂相所显示的不同复制带型,可初步确定大熊猫每一染色体独特的晚复制带纹。在雌性个体的两个Ｘ染色体中,一条Ｘ染色体复制明显落后于另一Ｘ染色体,尤其在迟复制Ｘ染色体长臂近着丝粒区显现出较宽的晚复制带纹。     

小鼠和人的混合染色体

它看上去完全是只小鼠,但也许稍微有一点点人的成分。同1 978年夏天在缅因州巴尔港的杰克逊实验室里出生的至少两只小鼠一样,这只小鼠也部分地是由含有一枚人染色体的细胞发育成的。这些小鼠为在实验动物中研究人的基因提供了条件。 Peter C.Hoppe认为:生物学家最终能够用这样的技术确定人染色体上的基因位点。目前,科学家已能够绘制在实验室里生长的细胞的染色体图,但是还存在一个问题,即在细胞培养中,染色体有丧失片段的趋向。     

果蝇细胞培养方法

动物的早期胚胎,组织或细胞通过组织培养技术可在一定的培养基上继续分化,发育和分裂,这是现代生物学的一项基本技术,是细胞生物学、遗传学、免疫学、病毒学、肿瘤学以及生物工程等许多学科的重要研究手段。由于果蝇具有取材便利,生活史短、细胞培养可以不用Co_2培养箱,加之在细胞原代培养过程中能够观察到多种细胞的分化状况等诸多优点,是细胞培养实验的极好材料。同时,由于果蝇的一个细胞系基本上是一个细胞株,给有关的科学研究带来极大的便利和好处,六十年代以来,国外不少实验室就开始了果蝇细胞培养工作     

鱼类染色体的白细胞一PHA活体内处理制片及其组型观察

目前,鱼类染色体标本制备的方法主要是 由Yamamot。等建立的肾细胞-PHA体外短期 培养法和Ojim：等提出的外周血淋巴细胞离体 培养法［[1,7,81,以及活体注射PHA直接用肾组 织的细胞制片等L3,41。用短期细胞培养研究鱼类 染色体有较突出的优点,它能保持染色体的自 然状态,染色体的形态特征较易于显示出来,中 期分裂相多,染色体分散均匀、清晰。但细胞培 养法需要有特定的条件,在设备差或野外工作 条件下不易做到,而且程序繁琐、费时较长（一 般需要3至10夭）L1], 在应用上受到一定的限 制。直接用常规空气干燥法制片,获得的中期分 裂相少,制片效果亦不理想L41。我们参照Baker 在蛇类的工作【s1并稍加改良,采用PHA活体内 注射取外周血,不需进行细胞体外培养和无菌 操作制备鱼类染色体标本。由于使用这种方法 可避免杀死动物,因此也可以连续检查同一个 体的染色体组型。我们所获得的初步结果,为研 究某些需要保持其继续存活的对象,如稀有的 杂交后代和通过细胞工程获得的少量实验对象 的染色体提供了一个新途径。同时,直接用从 活体繁殖的细胞制片,可以排除体外培养时可 能出现的有害效应,在环境监测中可望作为一 种监测手段用于水质污染与鱼类染色体损伤相 互关系的研究。     

肺炎球菌在不同培养基上的存活期及变异情况的比较

肺炎双球菌在培养基上存活的时间均较短,一般是1—2周,给工作造成了不少困难。为了解决这个问题,我们对肺炎球菌在三种不同培养基上的存活期及变异情况进行了比较,结果以新鲜脱纤维羊血培养基较好。保存在这种培养基上的肺炎球菌大多数可存活3个月以上,并很少变异,培养基的制备也很简便。     

一种快速判定细胞培养中支原体污染的方法——瓜氨酸测定法

目的：开发一种简便、快速、能及时发现细胞培养中支原体污染的方法。方法：用HPLC检测细胞培养中瓜氨酸是否存在及其量的大小。结果：当细胞培养被支原体污染时,培养基中精氨酸量明显下降,同时有瓜氨酸出现;当支原体被消除后,瓜氨酸即消失。结论：在细胞培养中瓜氨酸的出现与支原体污染的关系是特异的,用HPLC在2h内即可检出,表明该方法可靠、简便、快速,可作为细胞培养过程中支原体污染的常规监测手段。     

小型哺乳动物骨髓细胞染色体标本的直接制作方法

小动物骨髓细胞染色体标本在检测环境诱 裂剂^[1]方面有其独特性的优点,方法简捷,易于 掌握,不需特殊的细胞培养设备,一般实验室均 可进行。更重要的是能反映完整机体受环境的 影响及受损程度,在这点上优于体外的实验。 故将直接骨髓细胞染色体制作方法报告如下     

土豆汤琼脂培养基培养分枝杆菌的研究

本文报道了一种土豆汤琼脂培养基系统,试验过的16株各群分枝杆菌都能在该培养基上生长。大多数分枝杆菌在土豆汤琼脂培养基上的初生长时间快于罗氏培养基。分枝杆菌H_(37)R_v、鸟型,胃型、堪萨斯、脓肿、不产色和偶发等标准株,在一些土豆汤琼脂培养基上产生两种不同的菌落。初步的研究表明,土豆汤琼脂培养基还可用于胸水、痰内结核杆菌的培养。土豆汤琼脂培养基系用传统的琼脂培养基制作方法,价格低廉,适合在发展中国家的实验室和国内医院检验科推广使用。     

培养的哺乳动物细胞的辐射生物学

近年来,细胞培养的方法在细胞学、生理学和生化学等方面已开展了大量工作,特别是结合辐照,利用同位素标记,研究体外培养细胞的核酸和蛋白的变化,更使细胞培养方法独树一帜。在辐射生物学领域内,由于辐射损伤是多方面的(如分裂延缓、DNA链断裂、碱基损伤、染色体畸变等),而且不同辐照源及不同     

小鼠脾脏与骨髓细胞在微核试验和染色体畸变分析中的应用

由于小鼠骨髓多染红细胞微核(PCEMN) 试验法具有简便快速等优点,在遗传毒理学研 究中得到了广泛应用,但与中期细胞染色体畸 变（CA）分析法相比,能检测的染色体畸变类 型较少〔11。虽然小鼠骨髓染色体畸变分析可弥 补其不足,但认为难以得到足够的分裂相C2)。自 Nowell发现植物血凝素（PHA）在体外有刺 激细胞分裂的能力［19I; Moorhead等建立人外 周白细胞培养以来〔33, PHA 已广泛用于血细胞 转化试验。作者受吴氏启发‘31,应用PHA直接 注射于小鼠背部皮下,刺激脾胜、骨髓淋巴细胞 转化,有效地提高了它们的分裂指数,观察到 PHA对脾脏、骨髓PCEMN 和CA无任何影 响。经丝裂霉素C (MMC)验证表明,此法可 同时完成细胞染色体畸变率和微核率两项指标 的观察,不仅有利于活体样本中微核（MN）和 CA的相关性研究,而且脾脏和骨髓可以相互 替代,为评价被检物的毒理效应提供了方便。     

分枝杆菌全合成琼脂培养基的研究

本文报道了一种适合常见致病分枝杆菌生长的全合成固体琼脂培养基体系。它为实验室研究分枝杆菌的营养生理、生化特性、遗传变异、药理和耐药机制提供了一种新工具,也为研制更加满意的分枝杆菌培养基创造了条件。试验过的大多数非典型分枝杆菌,在全合成琼脂培养基上比在罗氏培养基上生长快,生长量少于或等于罗氏培养基。标准牛型株的细胞群体中,仅有少量细胞能在全合成琼脂培养基上生长。鸟型．胞内和偶发等分枝杆菌标准株在全合成琼脂培养基上产生两种不同的菌落。     

昆虫的组织培养

组织培养技术由Harrison在1907年开始创立,到目前已发展到一个新的阶段;这一技术被广泛应用于细胞学、肿瘤学、免疫学、病毒学、生理学、生化学、组织化学、遗传学等各门学科的研究领域中,对于脊椎动物和植物两方面的工作有很大的促进作用。至于在昆虫方面的工作因为开展较晚,目前仍存在不少问题。 组织培养技术是将各种各样的组织或细胞(包括人、动物、植物和昆虫等)置于各种玻璃器皿内进行离体人工培养的技术。在培养水平上一般可分为器官培养、组织培养和细胞培养三种,通常所说的组织培养则可笼统地包括这三个方面。1915年Goldschmidt首先将Harrison所创立的粗组织养方法用于昆虫组织,他用昆虫的血淋巴作为培养基培养蛾子的睾丸囊泡细胞,但是没有获得完满结果。本文主要介绍昆虫组织     

三倍体皱纹盘鲍活体倍性鉴定——用上足触手、外套膜活体组织制备染色体标本

以上足触手,外套膜活体组织为材料,采用PHA体外浸泡法,运用正交实验设计,探讨了暂养温度,PHA（植物血球凝集素）浓度及取材时间对细胞分裂频度的影响。根据直观分析,得出用上足触手,外套膜活体组织直接制备染色体标本进行三倍体皱纹盘鲍活体倍性鉴定的最优组合是：暂养温度20℃;PHA浓度为1．00％,取材时间17：00－18：00,3因素的主次顺序：暂养温度→PHA浓度→取材时间。并可获得大量图像清晰,长度适中,分散的中期分裂相。