重组鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白的抗原性研究

构建了鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白的原核表达载体,并对其进行了诱导表达,经过纯化,复性,获得了重组蛋白。用Westen-blotting和胶体金方法检测,此蛋白具有衣原体的免疫原性。经兔免疫接种实验,获得了多抗血清,用ELISA方法检测,其抗体滴度为1：2000。     

基于CRISPR/Cas9系统构建精准调控Wnt信号通路的表达载体及其效果的验证

目的:构建基于CRISPR/cas9系统调控Wnt信号通路的载体,并在细胞水平验证其调控基因表达的效率。方法:选取Wnt信号中负性调控分子,设计并合成能够表达靶向上述分子gRNA的互补DNA克隆序列,BsmBI限制性内切酶酶切载体后,采用分子克隆的方法将上述序列克隆至目的载体lenti-sgRNA-Ms2-zeo,测序正确的克隆通过Lipofectamine2000与lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine共同转染入293细胞;转染24h后收集细胞,qRt-PCR检测目的基因的表达。结果:筛选了Wnt信号通路中已知的19个负性调控基因;针对每个基因设计了两对gRNA序列,并构建了能够表达gRNA和MS2融合序列的载体,测序结果显示重组质粒的DNA序列与预期完全相符。随机挑选了4个表达载体与lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine共转进入细胞,qPCR结果显示构建的目的载体联合lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine载体可以协同促进靶分子表达。结论:本研究成功构建了基于CRISPR/cas9基因编辑系统调控Wnt信号的载体。     

PCR和RFLP分析技术在衣原体分类中的应用

衣原体是一类专性在真核细胞内营寄生生活的微生物,可在动动物和人中引起多种疾病,近年来越来越引起人们的重视,对衣原体的研究也逐步深入。传统的衣原体分类鉴定方法包括培养特征、形态学观察、血清学试验和致病性等。引入遗传学方法后,特别是近年来将聚合酶链式反应和限制性内切酶片段长度多态性分析技术应用到依原体分类鉴定中,使衣原体分类学得到了进一步发展。通常用来扩增的目的的基因是衣原体主要外膜蛋白基因和１６Ｓ－     

鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白基因序列的扩增、克隆和原核表达

主要外膜蛋白在鹦鹉热衣原体感染过程中起主要作用。扩增了主要外膜蛋白基因,克隆入pGEM-T和pET32a( ),经PCR筛选和酶切鉴定,进行诱导表达和重组蛋白的纯化与复性研究,为进一步进行鹦鹉热衣原体的诊断试剂和疫苗研究创造了条件。