基于表面等离子体共振和电化学联用的DNA传感器研究进展

表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术旨在检测物体表面附近折射率的变化,其特点是无标记、实时、灵敏和快速,该技术多用于研究分子的相互作用,包括动力学、效率常数和大分子构象变化等。电化学(electrochemical,EC)技术是一项用于定性定量研究电子转移、物质氧化还原、界面吸附等过程的成熟技术,具有简单、低成本和设备小型化的优点。现有的DNA杂交技术,例如光学、电化学或压电转导技术,主要关注于提高DNA杂交检测系统的选择性和灵敏度。传统的SPR在DNA分析方面,由于无法测量折射率的极小变化而在超灵敏检测中的应用受到限制。因此,随着纳米材料的研发和联用技术的飞速发展,SPR与EC联用的生物传感器研究越来越成为人们关注的热点。近年来,关于SPR和EC联用在DNA检测方面的综述鲜有报道。对SPR和EC检测DNA的技术原理、联用方法、应用进展等方面作出了简要的介绍,以期为表面等离子共振和电化学联用的DNA传感器相关研究提供参考。     

漆酶工程菌株的构建及其培养条件的研究

提取产漆酶白腐菌 (Fomelignosus)的总RNA ,利用RT_PCR的方法克隆到漆酶的cDNA ,并将其克隆到表达载体pPIC9k ,重组质粒经线性化、电激转化PichiapastorisGS115、通过底物显色反应筛选到漆酶生产工程菌株。其中 2 #工程菌株产酶活力较高。培养基、培养温度、诱导用甲醇浓度及培养基中铜离子浓度对该菌产酶活力均有一定的影响。在最适条件下 (用含 2 0 0 μmol LCu2 的BMMY培养基 ,于 2 0℃ ,2 5 0r min ;用 0 5 %甲醇诱导 )培养至第 6天时 ,该菌株产酶活力达到最高 (15 10U L)。     

漆酶高产工程菌构建及漆酶对RBBR的脱色作用

研究提取产漆酶白腐菌 (Fomelignosus)的总RNA ,利用RT PCR克隆到漆酶的cDNA ,并将其克隆到表达载体pGAPZA ,重组质粒经线性化、电激转化PichiapastorisGS115、通过底物显色反应筛选漆酶生产工程菌株 ,在最适培养条件下该菌株产酶活力高达 9 0 3U·mL-1。纯化得到漆酶对RBBR(RemazolbrilliantblueR)有很好的脱色作用 ,该酶的最适脱色pH为 5 0 ,最适脱色温度为 30℃。当溶液中漆酶活力为 1 0U·mL-1,在最适脱色条件下作用12h ,10 0mg·L-1RBBR溶液脱色率可达 90 %以上。     

变色栓菌产锰过氧化物酶的条件优化*

研究了多种培养基组分及培养条件对变色栓菌产锰过氧化物酶(MnP)的影响。当培养基中果糖浓度为20g/L,酒石酸铵浓度为10mmol/L,吐温80浓度为1.0g/L,MgSO₄·7H₂O为0.43g/L,最终pH为4.5,500mL三角瓶装液量为100mL,接种量为10片(8mm)菌苔,培养温度为30℃,转速为280r/min时,MnP的活力有了很大程度的提高,最高酶活力可达2,270U/L。     

变色栓菌产锰过氧化物酶的条件优化

研究了多种培养基组分及培养条件对变色栓菌产锰过氧化物酶(MnP)的影响.当培养基中果糖浓度为20g/L,酒石酸铵浓度为10mmoL/L,吐温80浓度为1.0g/L,MgSO4·7H2O为0.43g/L,最终pH为4.5,500mL三角瓶装液量为100mL,接种量为10片(φ8mm)菌苔,培养温度为30℃,转速为280r/min时,MnP的活力有了很大程度的提高,最高酶活力可达2,270U/L.     

数字PCR技术在核酸标准物质研制中的应用

在标准物质研制领域,生物标准物质的研制逐渐成为了研究热点,同时基于核酸的检测技术的开发与应用又推动了核酸标准物质的进程。核酸标准物质需要高级别、精准的定值方法,数字PCR作为单分子定量技术得到了广泛的应用。数字PCR是一种测定核酸分子的绝对定量方法,如微滴式数字PCR是采用油包水形成的微滴作为反应室,将含有DNA模板的反应溶液分配到大量独立的反应室中进行扩增反应,再通过统计反应室中的阳性信号来定量DNA的拷贝数,从而达到精确定量核酸拷贝数的目的。综述了近年来关于数字PCR及其在核酸标准物质研究领域的最新应用进展,重点综述了其在转基因检测、医疗诊断等领域的应用进展,以期为核酸标准物质的研制提供参考。     

酶分子体外定向进化的研究方法*

酶分子体外定向进化不仅可大幅度提高酶分子的进化效率,短期内在实验室完成自然状态下需要千百万年的进化过程,还可使酶分子按照人们期望的特定目标进化,因此对酶工程今后的发展非常重要。本对酶分子体外定向进化的研究方法进行了归纳总结。     

质量平衡法及其在标准物质定值中的应用进展

为保证不同地区、不同时间测量结果的可比性，测量结果需溯源至适当的、规定的参考标准。对于化学、生物、工程、物理学领域的材料和样品测量，该参考标准为标准物质。由此可见，标准物质的定值对物质的检测及定量是十分重要的。标准物质（reference material，RM）是一种足够均匀的、具有一种或多种相对容易确定的特性值的材料或物质，可用于给材料赋值、评价测量方法及校准测量仪器等。质量平衡法作为标准物质的定量方法之一，是一种常用的纯度测量方法，将水分、灰分、挥发组分、无机元素等杂质的含量从100%中扣除，再根据主要组分在有机组分中的百分比来确定物质纯度。质量平衡法具有较高准确度，能够溯源到国际单位制中的质量单位，且若使用基准方法测量样品中的主成分及各部分杂质以完成整个质量平衡法的测量，质量平衡法则有望成为新的基准方法。基于此，对质量平衡法原理及质量平衡法在标准物质的研制中的应用进行了介绍，并对近期质量平衡法在标准物质中的最新应用进行了总结，以期探索质量平衡法在标准物质研制中的更多可能。