家蚕Bms3a基因真核表达载体的构建及其在家蚕细胞和蚕体中的表达

Bms3a基因可能在家蚕Bombyx mori抗病或细胞凋亡中有一定的作用。将融合有绿色荧光蛋白的Bins3a基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac1中获得了pFastBac-IE1-Bms3a-EGFP真核表达载体,利用杆状病毒(Bac-to-Bac)表达系统筛选重组杆状病毒,以重组病毒感染家蚕BmN细胞和五龄幼虫,分别在感染24h和48h检测到有绿色荧光蛋白的表达,Western blot证明表达的融合蛋白在相对分子量约57kD处出现特异条带,与预计的蛋白理论值相符。结果表明BmS3A-EGFP融合蛋白在家蚕细胞BmN及幼虫体中得到高效表达。研究结果为进一步研究BmS3A蛋白的功能奠定了基础。     

慢性阻塞性肺疾病不同表型患者CAT评分与肺功能及预后的相关性分析

摘要 目的：探讨慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）不同表型评估测试问卷（COPD assessment test,CAT）评分与肺功能及预后的关系。方法：收集361例COPD患者临床资料、CAT评分、肺功能检查结果及肺外合并症、肺内并发症等情况,按临床表型分为肺气肿组（n=200）和支气管炎组（n=161）,分析肺气肿组200例和支气管炎组161例COPD患者CAT评分与肺功能及预后的关系。结果：肺气肿组CAT评分高于支气管炎组（P<0.05）,一秒用力呼气容积（FEV₁）占预计值百分比（FEV₁%）、FEV₁/用力肺活量（FVC）低于支气管炎组（P<0.05）,吸气分数（IC/TLC）低于支气管炎组,残总比（RV/TLC）高于支气管炎组（P<0.05）;肺气肿组肺间质性病变、肺动脉高压发生率均高于支气管炎组（P<0.05）;支气管炎、肺气肿组CAT评分均与FEV₁%、FEV₁/FVC、IC/TLC呈负相关（P<0.05）,与RV/TLC呈正相关（P<0.05）,肺气肿各参数相关度更高（P<0.05）;肺气肿组不同CAT评分患者肺间质性病变、肺动脉高压发生率比较差异有统计学意义（P<0.05）,支气管炎组不同CAT评分肺动脉高压发生率比较差异有统计学意义（P<0.05）,随CAT评分的升高,肺气肿组肺间质性病变、肺动脉高压发生率上升,支气管炎组肺动脉高压发生率上升。结论： COPD肺气肿表型CAT评分较支气管炎表型高,肺功能降低更明显,呈现肺过度通气,气流受限特点,更易并发肺间质纤维化、肺动脉高压,且与CAT评分变化密切相关。     

双歧杆菌调节VIP/cAMP/PKA和mTOR通路改善溃疡性结肠炎小鼠的实验研究

摘要 目的：探讨双歧杆菌MIMBb75通过调节血管活性肠肽（VIP）/环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A（PKA）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路对溃疡性结肠炎（UC）小鼠的影响。方法：BALB/c小鼠随机分为正常对照（NC）组、结肠炎模型（UC）组、Mesalazine组和MIMBb75低、高剂量组、MIMBb75高剂量+VIP antagonist组、MIMBb75高剂量+MHY1485组（每组10只）,除NC组外均采用5%葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导UC模型。治疗结束后,观察小鼠的一般情况及UC疾病活动指数（DAI）,检测小鼠肠道组织病理损伤、结肠组织中髓过氧化物酶（MPO）活性、肠道菌群多样性（Chao指数、Shannon指数和Simpson指数）及结肠组织VIP、cAMP、PKA、水通道蛋白3（AQP3）、mTOR、核糖体蛋白S6激酶（S6K1）的mRNA和蛋白水平。结果：与UC组相比,MIMBb75低、高剂量组和Mesalazine组小鼠的体重升高、DAI评分降低,组织病理损伤得到改善,结肠长度增加,MPO活性降低,Chao指数、Shannon指数和Simpson指数升高;VIP、cAMP、PKA、AQP3的mRNA水平和VIP、cAMP、AQP3蛋白的表达及PKA的磷酸化水平升高,mTOR和S6K1 mRNA及其蛋白的磷酸化水平降低（P<0.05）。与MIMBb75高剂量组相比,MIMBb75高剂量+VIP antagonist组VIP、cAMP、PKA、AQP3的mRNA水平和VIP、cAMP、AQP3蛋白的表达及PKA的磷酸化水平降低（P<0.05）;MIMBb75高剂量+MHY1485组mTOR和S6K1 mRNA及其蛋白的磷酸化水平升高（P<0.05）。VIP antagonist和MHY1485均能逆转MIMBb75对UC小鼠的保护作用,使其结肠损伤加重,MPO活性增高（P<0.05）。结论：双歧杆菌可改善UC小鼠的结肠损伤,增加肠道菌群的多样性,这可能与激活VIP/cAMP/PKA通路、抑制mTOR通路有关。     

成体心脏干细胞经静脉移植后在心梗小鼠体内的分布研究

目的：观察心肌梗死小鼠静脉移植成体心脏干细胞后,细胞在小鼠体内各器官的分布情况。明确心梗后静脉移植成体心脏干 细胞在小鼠体内的分布和归巢情况。方法：分离培养小鼠心脏成体干细胞,采用流式细胞仪鉴定细胞,通过亲脂性染料CM-DiI标 记细胞后行小鼠急性心肌梗死模型建立和细胞移植,分别在细胞移植后7、14、8 天取小鼠心脏、肝脏、脑、脊髓、肺脏,行冰冻切 片,在荧光显微镜下观察移植细胞在各组织器官存活和分布情况。结果：成体心脏干细胞分离培养后呈贴壁生长,流式细胞仪检 测显示细胞纯度>80%。CM-DiI标记后荧光显微镜下观察可见标记的细胞胞浆胞核均被染成呈明亮的红色。心肌梗死后经静脉 移植成体心脏干细胞,细胞在各组织中分布呈变化过程,7 天时,在肺脏和肝脏分布较多,至14 天和28 天时,肺脏和肝脏分布减 少,心脏分布逐渐增多,表现出向心脏的" 归巢" 现象,而脑和脊髓在28 天的观察时间内分布较少。结论：采用CM-DiI标记心 脏成体干细胞,操作简单,标记效果好,可用于短期的细胞体内追踪。小鼠心肌梗死后行经静脉成体心脏干细胞移植,28 天后细胞 在心脏的分布逐渐增多,表现出向心脏的" 归巢" 现象。