猪细小病毒NS1基因的克隆与序列分析

目的:扩增猪细小病毒(Porcine Parvovinls,PPV)LJL12株NS1基因的全长序列,并进行同源性分析.方法:参考GenBank上公布的PPV中国株NS1基因序列,设计一对特异性引物增LJL12株NS1基因,测定序列,使用分子生物学软件进行同源性分析.结果:LJL12 株 NS1 基因伍长 1989bp,编码 662个氨基酸.与其他 PPV 中国株 NS1 的核苷酸同源性在 98.6%～100%之间,氨基酸同源性在98.5%～100%之间.其中,与南京株的同源性最高.结论:PPV NS1 蛋白具有高度保守性,适合用作诊断抗原.LJL12 株PPV NS1 基因的克隆,为进一步研究 NS1 的功能和作用奠定了基础.     

猪细小病毒NS1蛋白主要抗原表位区的原核表达

目的：用大肠杆菌表达猪细小病毒NS1基因的主要抗原表位区。方法：通过对GenBank发表的猪细小病毒（Porcine Par-vovirus,PPV）中国株非结构蛋白NS1的氨基酸序列分析,确定了其中抗原性较高的区域,针对此区域设计并合成了一对特异性引物,扩增出包含NS1主要抗原表位区的843bp的片段。酶切后连接到原核表达载体pET30a（＋）上,构建的原核表达载体pET30a-NS1s转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,诱导表达。结果：重组蛋白大小约为43kD,与预期大小相符。Westernblot分析表明,该蛋白能与标准阳性血清发生特异性反应,证明该蛋白具有生物学活性。结论：NS1蛋白主要抗原表位区在大肠杆菌中成功表达,具有免疫原性。可作为鉴别诊断抗原用于PPV的临床检测。     

PRRSV核衣壳蛋白(N蛋白)的克隆及其原核表达

目的:采用基冈工程手段表达PRRSV VR 2332菌株的核农壳蛋白(N蛋白).方法:利用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)VR 2332菌株的核衣壳蛋白(N蛋白)基冈并将其克降到原核表达载pET30a( )上,得到重组质粒rpEI30a-PRRSV/N,并将其转入受体菌E.coli B121(DE3)pLysS感受态细胞中,经IPTG诱导,通过SDS-PAGE电泳检测和Western blotting分析表达产物的特性.结果:SDS-PAGE电泳检测和Western blotting分析结果表明,表达的蛋白大小约为19kDa,符合预期结果,并能与抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体发生特异性反应,说明表达的蛋白具有良好的免疫原性,可应用于临床PRRSV抗体的检测.结论:在大肠杆菌表达系统内成功表达了PRRSV核农壳蛋白(N蛋白).     

新城疫病毒F和HN蛋白的原核表达

目的：高水平表达新城疫病毒（Newcastle Disease Virus,NDV）标准强毒F48E8株的F基因和HN基因。方法：利用PCR法扩增出新城疫病毒（Newcasfle Disease Virus,NDV）标准强毒F48E8株的去掉N端信号肽和C端跨膜区的F基因和HN基因并其克隆到原核表达载pET30a上,得到重组质粒rpET30a-NDV／F和rpET30a-NDWHN,转化到受体菌Rosetta-gami^TM2感受态胞中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot检测。结果：表达的F蛋白大小约为40kD,HN蛋白大小约为51kD左,符合预期结果。Westem blot分析表明,能与抗His-tag单克隆抗体发生特异性反应。结论：重组蛋白在原核表达系统内得到高水平的表达。说明了去除F和HN基因N端信号肽和C端跨膜区的必要性。方将细右了