通过双原核显微注射提高转基因小鼠研制效率的实验研究

目的建立高效的转基因小鼠制备技术,为开展遗传工程动物模型研究奠定技术基础。方法通过向小鼠受精卵原核中注入不同浓度的DNA分子,筛选最适注射用DNA浓度;将K14/hCTLA4-Ig基因表达载体分子通过显微注射分别导入小鼠受精卵雌、雄原核,并设立单原核注射对照组;利用输卵管腹壶部穿刺移植法将注射后的小鼠受精卵移植于同期发情的受体母鼠;利用PCR对出生的转基因首建小鼠进行筛选。结果最适DNA分子浓度为10ng/μl;在单、双原核注射组胚胎2细胞卵裂率分别为52.3%(132/253)和45.0%(108/240),差异有显著性(P<0.05);注射胚胎移植后体内存活率分别为18.1%(24/132)和16.7%(18/108),差异无显著性;转基因首建小鼠阳性率分别为3/24和5/18,转基因阳性小鼠占总注射胚胎的比例为1.2%(3/253)和2.08%(5/240),差异有极显著性(P<0.01)。结论尽管双原核注射对胚胎的2细胞卵裂率有一定影响,但通过双原核注射可有效提高转基因小鼠的制备效率。     

中国鰕虎鱼类三新纪录

最近,作者在整理我所收藏的(鱼叚)虎鱼类过程中,发现有三种在我国还未被报道过。现简报如下: 1.拟丝(鱼叚)虎鱼Cryptocentroides insignis(seale) 背鳍Ⅵ,Ⅰ—12;臀鳍Ⅰ—12;胸鳍16。纵列鳞62—70,横列鳞21—23。体长为体高5.8—6.3倍,为头长3.7—3.8倍.头长为吻长4.1—4.6倍,为眼径4—4.3倍,为眼间隔11.7—12.7倍。体侧具     

人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ与人IgG∶Fc的融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

采用PCR方法引入编码氨基酸残基序列为GGGGSGGGGS的接头,将sTNFR1 cDNA与人IgG:Fc cDNA片段连接,构成融合基因fusion 1。将fusion 1克隆在pBSⅡ SK+载体上。测定序列后,转入pRSET-B表达载体,在大肠杆菌中表达,得到分子量 为45kDa的蛋白,超声破碎后电泳证明表达的蛋白为包涵体,经免疫蛋白印迹证实为我们构建的融合蛋白。     

海南岛刺鲃属Puntius Hamilton鱼类一新种

1965年冬季,我们在进行海南岛淡水鱼类区系调查时,在陵水溪和藤桥溪采到19尾体长不超过55毫米的一种小型鲤科鱼的标本,经鉴定认为是刺鲃属 Puntius Hamilton一新种,现命名:记述如下:     

转hCTLA4-IgG基因小鼠移植皮肤在糖尿病大鼠创面存活的延 长

CTLA4-IgG是呈分泌性表达的CTLA4胞外区与人IgG恒定区的融合分子 ,可有效阻断T细胞B7-CD28共刺激信号通路,从而抑制T细胞活化、延长移 植物存活.糖尿病溃疡创面难愈合是其高致病力和高致残率的主要原因,而 及时有效的封闭创面是创面愈合的关键.异种（异体）皮肤是应用广泛的创 面覆盖物,但免疫排斥反应是移植皮肤存活的主要障碍.通过建立糖尿病大 鼠溃疡创面模型,研究表达人CTLA4-IgG蛋白的转基因小鼠皮肤在糖尿病大 鼠溃疡创面的存活及对创面愈合的影响.结果发现：糖尿病大鼠溃疡创面的 自然愈合时间显著长于正常大鼠(41.7±7.4 d vs 18.5±6.9 d, P <0.01),说明糖尿病大鼠及其溃疡模型已建立;在糖尿病大鼠创面,转 基因皮肤存活时间为22.2±5.8 d,显著长于野生型皮肤(8.2±1.8 d, P<0.01);在转基因皮肤移植后27d,糖尿病大鼠创面已完全愈合, 显著快于其自然愈合过程;在供、受体混合淋巴细胞反应（MLR）中,转基 因皮肤移植受体的淋巴细胞对供体抗原的应答能力与野生型皮肤移植受体无 显著差异.上述结果表明,移植皮肤表达人CTLA4-IgG蛋白可显著延长其在 糖尿病大鼠创面的存活时间,进而促进创面愈合,并对受体免疫系统无显著 的全身性影响     

游泳动物对长江口新生盐沼湿地潮沟生境的利用

利用长袋网(fyke net)采集了长江口新生盐沼湿地潮沟内的游泳动物,分析了该类盐沼湿地的鱼类栖息地利用。结果表明,3次调查共记录到游泳动物20种,其中鱼类15种,虾蟹类5种。生态类群主要以淡水性种类(10种)和河口性种类(6种)为主,洄游性种类(3种)和海洋性种类(1种)较少。从数量组成来看,游泳动物群落主要由安氏白虾(35.4%)、棕刺虾虎鱼(17.7%)、贝氏餐(17.7%)、长蛇鮈(9.2%)和日本沼虾(4.6%)等少数几个物种占优势。这些游泳动物大多为稚幼个体,表明长江口新生盐沼湿地是许多鱼类和甲壳动物的重要育幼场所。     

宽鳃鮟鱇属一新种

20世纪70年代以前,全世界已知宽鳃鮟鱇属Sladenia Regan(1908)鱼类仅有3种。1980～1982年期间,东海水产研究所"东方"号和南海水产研究所"南锋"号调查船分别在东海和南海的大陆架渔场调查时,共采集到4尾珍稀的深海鮟鱇鱼类。经研究,认为这4尾标本是1新种,定名为朱氏宽鳃鮟鱇Sladenia zhui sp.nov.。     

皮肤组织特异性表达hCTLA4-Ig转基因小鼠品系的建立

为研究皮肤特异性高效表达hCTLA4-Ig分子对移植皮肤存活及受体免疫功能的影响,充分实现hCTLA4-Ig分子在皮肤移植中的免疫调控功能,利用K14（角蛋白14）基因启动子,构建了hCTLA4-Ig分子皮肤组织特异性表达载体,并通过受精卵原核显微注射技术制备了K14／hCTLA4-Ig转基因小鼠并建立了品系。通过RT-PCR和Northern blot分析表明,hCTLA4-Ig在转基因小鼠体内呈皮肤组织特异性高效表达;以GAPDH基因的表达量为内部参照分析表明,hCTLA4-Ig的表达水平在不同世代之间以及转基因个体的不同生命时相点之间保持相对恒定,说明皮肤组织特异性稳定表达hCTLA4-Ig的转基因小鼠品系已被建立。     

浙南近海凤鲚时空分布及生物学分析

凤鲚（Coilia mystus）作为浙南近海的经济鱼类之一,近年来,由于长期的过度捕捞,其数量迅速下降。为探究浙南近海凤鲚资源的变动情况及其生物参数,2020年5月至2021年1月对浙南近海21个调查站位进行4个航次的底拖网调查,以生物量、丰度作为资源分布的数量指标,采用ELEFAN Ⅱ技术和Beverton-Holt动态综合模型对凤鲚的生长和死亡参数进行估算并分析凤鲚资源变动趋势。结果表明：4个航次共采集凤鲚903尾,总出现率为52.4%,生物量和丰度最高值出现在夏季,分别为24.46 kg/km²和2.33×10³ ind./km²;体长范围为43~224 mm,优势体长组为100~180 mm,占全年总数的84.81%,体长（L）和体重（W）的关系式为W=1.25×10^-6L^3.2693 （R²=0.9448）;体重的生长拐点年龄为1.20 a。采用Pauly 经验公式估算出凤鲚的自然死亡系数为0.75,采用长度变换渔获曲线法估算凤鲚的总死亡系数为3.06,捕捞死亡系数为2.31,当前开发率为0.76。Beverton-Holt动态综合模型显示,浙南近海凤鲚已处于过度开发状态。为有效保护并恢复浙南近海凤鲚资源,建议设立凤鲚种质资源保护区,加强对凤鲚产卵场、仔稚鱼保育场的保护。