Purification and characterization of Moschatin, a novel type Ⅰ ribosomeinactivating protein from the mature seeds of pumpkin (Cucurbita moschata), and preparation of its immunotoxin against human melanoma cells

A novel ribosome-inactivating protein designated Moschatin from the mature seeds of pumpkin (Cucurbita moschata) has been successively purified to homogeneity, using ammonium sulfate precipitation, CM-cellulose 52 column chromatography, Blue Sepharose CL-6B Affinity column chromatography and FPLC size-exclusion column chromatography. Moschatin is a type 1 RIP with a pI of 9.4 and molecular weight of～29 kD. It is a rRNA N-glycosidase and potently blocked the protein synthesis in the rabbit reticulocyte lysate with a IC_(50) of 0.26 nM. Using the anti-human melanoma McAb Ng76, a novel immunotoxin Moschatin-Ng76 was prepared successfully and it efficiently inhibited the growth of targeted melanoma cells M_(21) with a IC_(50) of 0.04 nM, 1500 times lower than that of free Moschatin. The results implied that Moschatin could be used as a new potential anticancer agent.     

基于线粒体 CO玉及 Cyt b 基因的7种龙虾类分子系统关系

运用 PCR 法扩增湛江沿海海域7种龙虾的线粒体 CO玉和 Cyt b 基因并对其序列进行分析,以分析7种龙虾的分子系统关系.从 7种龙虾中扩增到的 CO玉基因片段长度均为650 bp,共存在224个核苷酸位点变异,变异率为35.22%,简约信息位点161个;扩增到的 Cyt b 基因片段长度均为536 bp,共存在148个核苷酸位点变异,变异率为29.48%,简约信息位点66个.所有的扩增序列中,没有发现碱基的缺失以及插入,序列中的转换大于颠换,且碱基替换多发生于密码子的第3位.以帝加洛真龙虾(Palinurus delagoae)、普通真龙虾(Palinurus elephas)、吉氏真龙虾(Palinurus gilchristi)为外群,对 CO玉和 Cyt b 两个基因序列采用最大简约法(maximum parsimony, MP)和贝叶斯推论法(bayesian inference, BI)构建龙虾类分子系统树.结果显示:日本龙虾和密毛龙虾亲缘关系比较近,而其它5种龙虾与真龙虾属的3种关系较近,与传统的分类存在一定分歧.     

A Stable Upstream Stem-loop Structure Enhances Selection of the First 5''''-ORF-AUG as a Main Start Codon for Translation Initiation of Human ACAT1 mRNA

Acyl-coenzyme A:cholesterol acyltransferase (ACAT)is an integral membrane protein, which is mainly locatedin rough endoplasmic reticulum (ER), and is responsiblefor catalyzing the intracellular formation of cholesterylester from cholesterol and long-chain fatty acyl-coenzymeA [1,2]. Human ACAT1 cDNA K1 was firstly cloned andfunctionally expressed in 1993 [3]. Further studies withspecific anti-ACAT1 antibody (DM10) illustrated that onemajor 50 kD ACAT1 protein was expressed in various…     

重组人中期因子midkine对大鼠膝关节软骨部分损伤的修复作用

目的:通过外源注射不同剂量的重组人中期因子midkine(rhMK),研究其对大鼠膝关节软骨部分损伤的修复作用。方法:雄性SD大鼠双侧膝关节建立软骨部分损伤的动物模型,术后24小时分别向关节腔内注射生理盐水或rhMK (20μg/kg、60μg/kg、180μg/kg)。于术后8周将大鼠全部处死,取材进行组织学观察,从而确定最佳注射剂量;在药代动力学研究中,按最佳注射剂量向正常大鼠膝关节腔内注射rhMK,分别于注射后1小时、1天、3天、6天、9天、12天和15天处死大鼠,检测膝关节软骨组织中rhMK的含量。结果:不同剂量的重组蛋白对膝关节软骨部分损伤均有不同程度的修复作用,其中180μg/kg的剂量效果最佳;以180μg/kg的剂量向正常大鼠膝关节腔内注射rhMK后,经过Kinetica5.0药代动力学软件拟合后,计算得rhMK在软骨组织中的消除相半衰期为8.69天。结论:rhMK对大鼠膝关节软骨部分损伤有明显的修复作用,最佳注射剂量为180μg/kg,最佳注射时间间隔为8天。     

细胞因子与膜受体蛋白相互作用的研究方法

细胞因子与膜受体的相互作用是生命活动中的重要环节。癌症、自身免疫疾病、代谢紊乱等疾病的发生都和细胞因子失调有着密切的关系,研究细胞因子和受体的相互作用成为治疗上述疾病的基石。本文综述了现今常用的研究方法,包括从最经典的同位素标记直接检测受体与配体的结合,到生化通路下游信号检测,再到生物物理高通量检测方法。     

Fusion Protein of Interleukin 4 and Diphtherial Toxin with High Cytotoxicity to Cancer Cells

One means to improve the selectivity of cancer therapyis by directing foreign protein with activity againsttherapeutic targets that displays different expression levelon malignant cells from normal cells. There have hadsubstantial efforts to rationally de…     

S100A4原核表达载体的构建以及蛋白的表达和纯化

S100A4是S100蛋白家族的成员,在细胞的增殖、分化、损伤修复以及肿瘤细胞转移等方面发挥重要的调控作用.本研究将S100A4全长基因构建到pET28a原核表达载体上,利用大肠杆菌表达系统表达和纯化出高纯度的重组人S100A4.通过试验证明,重组人S100A4蛋白在体外可以有效地增强黑色素瘤细胞A375-S2的增殖.重组人S100A4原核表达与纯化方法的建立将促进其结构和生物学功能研究,并且对于S100蛋白家族其它蛋白的表达与纯化具有重要的参考意义.     

植物褪黑素及其抗逆性研究

褪黑素(N-乙酰-5-甲氧基色胺)是脊椎动物的松果体产生的吲哚类激素,主要参与动物昼夜节律调节.现已证实褪黑素在高等植物中也普遍存在,但对其功能的研究还不甚深入.目前,植物中褪黑素的可能功能包括清除自由基、调节光周期、参与生长调节等.本文简述了植物中褪黑素的研究概况、含量及其合成途径,重点综述了其在提高植物抗逆性方面的功能,并对其研究前景进行展望.     

蛋白质组学在哺乳动物睾丸和精子发生中的应用

“蛋白质组学”一词由Wilkins在1994年提出,被称作后基因组时代一个新兴的研究手段.它从整体水平上对组织或者细胞的蛋白质表达、功能、相互作用进行研究,现在成为生命科学未来发展的主要分支之一.睾丸是哺乳动物雄性生殖系统中的一个重要的器官,由曲精小管和间质细胞组成.蛋白质组学在睾丸和精子发生研究上的应用及其技术手段的不断创新,对睾丸功能、生殖机理、生殖疾病的研究起到了极其重要的作用.所以,从蛋白质水平对睾丸和精子发生进行研究,为更好地理解雄性哺乳动物的生殖机理和疾病提供了一个新思路.