TaqMan探针双重荧光定量PCR同时检测解脲支原体和巨细胞病毒

目的探讨双重荧光定量PCR技术的优化条件,建立基于TaqMan探针技术荧光定量法检测同时检测解脲支原体和巨细胞病毒的新方法。方法分别采用普通定性PCR扩增母婴垂直传播常见的病原体（解脲支原体和巨细胞病毒）测序鉴定,然后分别采用TaqMan探针的单重和双重定量PCR技术对解脲支原体和巨细胞病毒同时定性定量检测。结果解脲支原体和巨细胞病毒单种定性PCR检测均为阳性,TaqMan探针单重和双重定量PCR检测解脲支原体和巨细胞病毒阳性率和特异性均为100％,相同样品TaqMan探针单重、双重定量PCR分别检测的结果符合率100％。结论TaqMan探针双重荧光定量PCR技术可同时检测两种靶分子,结果可靠,应用前景广阔。     

不同保存和处理方式对全血标本总RNA提取的影响

目的分析全血标本RNA提取的影响因素,并对全血RNA提取条件进行优化。方法收集100例全血标本,混匀后分为低渗红细胞溶解组(A组,50例)和全血直接提取组(B组,50例),利用Trizol试剂提取放置在不同温度、不同保存时间的全血标本总RNA,并采用Ur-2401紫外分光光度计测定其浓度和纯度;另选60例全血标本作为反复冻融组(C组),取不同次数反复冻融的全血标本利用Trizol法直接提取其RNA。结果 A组和B组新鲜标本中所获取的RNA浓度分别为450.0 ng/μL和458.8 ng/μL,37℃保存7 d标本中的RNA浓度分别为374.8 ng/μL和375.2 ng/μL,不同的保存温度与时间均对总RNA浓度(P=0.003、P=0.002)和纯度(P值均为0.011)的差异均有统计学意义,而相同条件下提取的总RNA浓度和纯度的差异无统计学意义(P=0.984、P=0.311);C组全血标本反复冻融的次数与保存时间对总RNA浓度(P=0.002、P=0.001)、纯度(P值均为0.008)差异均有统计学意义,而保存温度对总RNA浓度和纯度差异无统计学意义(P=0.611、P=0.362)。结论不同条件下全血标本中所获取的总RNA浓度有所差异,但在总RNA纯度和成功率方面,低渗破坏红细胞法优于直接全血提取法,反复冻融影响全血RNA提取效率和得率。