利用比较基因组学方法对猪BACDNA序列分析来研究抑肌素基因的调控

抑肌素(GDF8, MSTN)是调控骨骼肌发育的TGF-b超家族的一员. 作为负调节因子, 抑肌素通过控制肌纤维的大小和数量来调控骨骼肌的发育. 为了更深入研究它的表达和调控模 式, 我们利用比较基因组学方法对一个大约170 kb的猪BAC序列与人和小鼠的相应序列进行了分析, 这段基因组序列的特点是富含分散型重复而G+C含量较低. 抑肌素基因的同源性在猪、人和小鼠3种生物之间非常高, 正如所希望的, 在人与猪之间的同源性高于它们与小鼠的同源 性. 一个有意思的特征是在抑肌素启动子CCAAT盒下游有两个TA盒, 进一步分析表明TA盒1负责在人、猪中转录, 而TA盒2在小鼠中起作用; 另一个的特征是在猪抑肌素3′UTR有两个polyA信号序列(AATAAA). 进而, 我们在进化保守区域分析到许多潜在的转录因子结合位 点, 它们可能与抑肌素的调控有关. 许多潜在的转录调控因子在肌肉的发育中起重要作用, 暗示着抑肌素与这些因子的复杂相互作用可能是正常肌肉发育所必需的(文中所提到的序列已提交到GenBank, 序号为: AY208121).     

利用比较基因组学方法对猪BAC DNA序列分析来研究抑肌素基因的调控

抑肌素(GDF8, MSTN)是调控骨骼肌发育的TGF-b超家族的一员. 作为负调节因子, 抑肌素通过控制肌纤维的大小和数量来调控骨骼肌的发育. 为了更深入研究它的表达和调控模式, 我们利用比较基因组学方法对一个大约170 kb的猪BAC序列与人和小鼠的相应序列进行了分析, 这段基因组序列的特点是富含分散型重复而G+C含量较低. 抑肌素基因的同源性在猪、人和小鼠3种生物之间非常高, 正如所希望的, 在人与猪之间的同源性高于它们与小鼠的同源性. 一个有意思的特征是在抑肌素启动子CCAAT盒下游有两个TA盒, 进一步分析表明TA盒1负责在人、猪中转录, 而TA盒2在小鼠中起作用; 另一个的特征是在猪抑肌素3′UTR有两个polyA信号序列(AATAAA). 进而, 我们在进化保守区域分析到许多潜在的转录因子结合位点, 它们可能与抑肌素的调控有关. 许多潜在的转录调控因子在肌肉的发育中起重要作用, 暗示着抑肌素与这些因子的复杂相互作用可能是正常肌肉发育所必需的(文中所提到的序列已提交到GenBank, 序号为: AY208121).     

利用比较基因组学方法对猪BAC DNA序列分析来研究抑肌素基因的调控术

抑肌素(GDF8,MSTN)是调控骨骼肌发育的TGF-β超家族的一员.作为负调节因子,抑肌素通过控制肌纤维的大小和数量来调控骨骼肌的发育.为了更深入研究它的表达和调控模式,我们利用比较基因组学方法对一个大约170kb的猪BAC序列与人和小鼠的相应序列进行了分析,这段基因组序列的特点是富含分散型重复而G+C含量较低.抑肌素基因的同源性在猪、人和小鼠3种生物之间非常高,正如所希望的,在人与猪之间的同源性高于它们与小鼠的同源性.一个有意思的特征是在抑肌素启动子CCAAT盒下游有两个TA盒,进一步分析表明TA盒1负责在人、猪中转录,而TA盒2在小鼠中起作用;另一个的特征是在猪抑肌素3′UTR有两个polyA信号序列(AATAAA).进而,我们在进化保守区域分析到许多潜在的转录因子结合位点,它们可能与抑肌素的调控有关.许多潜在的转录调控因子在肌肉的发育中起重要作用,暗示着抑肌素与这些因子的复杂相互作用可能是正常肌肉发育所必需的(文中所提到的序列已提交到GenBank,序号为:AY208121).     

人α-乳清蛋白基因的克隆及其在转基因小鼠中高效表达

从粘粒文库中筛选出人α-乳清蛋白基因,构建9.5 kb的转基因表达载体.利用显微注射的方法获得68只F₀代小鼠,经PCR检测和DNA印迹分析证实有8只小鼠（4♂,4♀）为整合人α-乳清蛋白基因的转基因阳性小鼠,整合率为11.7%,整合拷贝数在1至8之间.利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和蛋白质印迹分析,4只雌性F₀代转基因阳性小鼠全部表达了人α-乳清蛋白.放射免疫测定法测定,含量分别为0.62 g/L、0.48 g/L、0.56 g/L、3.21 g/L;同时测定F₀代50号转基因公鼠的后代阳性母鼠（50-2号）乳样中人α-乳清蛋白含量也达到1.03 g/L,证明由原代转基因公鼠遗传给后代的人α-乳清蛋白基因亦获得了稳定的表达.所构建的人α-乳清蛋白转基因载体具有结构较小,表达量高,可以稳定遗传等优点.为利用人α-乳清蛋白基因改善牛乳成分和品质奠定了基础.     

鸡形目鸟类成熟胸肌中特异性表达的fTnT同工异构型及其生理学意义

脊椎动物中的肌钙蛋白T（tropnin T,TnT）分为心肌型TnT（cardiac TnT,cTnT）、快肌型TnT（fast skeletal TnT,fTnT）和慢肌型TnT（slow skeletal TnT,sTnT）,且每种TnT又因mRNA可变剪接(alternative mRNA splicing)形成了多种同工异构型,其中fTnT的同工异构型形式最为复杂。某些鸟类如鸡形目鸟类的成熟快肌（尤其是胸部快肌）中特异性表达的TnT同工异构型有如下特点：（1）N端区含有过渡金属离子结合位点——Tx元件（一般为4~7个重复的H-E/A-E-A-H序列）;（2）与哺乳动物及雏鸟fTnT相比,其C端区外显子16有很高的表达率。本文还就鸡形目鸟类成熟胸肌中表达的fTnT同工异构型可能具有的生理学意义及应用前景进行了探讨。 The Fast TnT Isoforms Specifically Expressed in Avian Adult Pectoral Muscles of Galliforms and Physiological Significance DUAN Ying-li,YU Shu-yang,LI Ning National Laboratories for Agrobiotechnology,China Agricultural University,Beijing 100094,China Abstract:Three homologous genes have evolved to encode the cardiac,slow and fast skeletal muscle troponin Ts(TnTs) in the vertebrate.Multiple isoforms in each type of TnT are generated through alternative mRNA splicing during the development and the modality of the fast skeletal TnT isoforms is the most complex.The TnT isoforms specifically expressed in avian adult fast skeletal muscle (especially in the adult pectoral muscle) of Galliforms have been characterized as follows:1.There exist a cluster of transition metal ion binding sites ［generally 4~7 repeats of a sequence motif His-(Glu/Ala)- Glu-Ala-His,designated as Tx］ in the NH2-terminal variable region.2.Compared with mammalian TnT and the neonatal or young avian TnT,these avian pectoral muscle TnTs prefer to express exon 16 in the COOH-terminal variable region.Furthermore,possible effects of the pectoral fTnT isoforms on the physiological activity are discussed in this article. Key words：Aves; troponin T; isoform