同型半胱氨酸与不同类型卒中的相关性研究

目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）与不同类型脑卒中的关系,并对高Hcy血症成因作初步分析。方法：测定225例缺血性脑卒中和40例出血性脑卒中患者以及85例同龄健康受试者的血浆Hcy水平以及叶酸、维生素B12的浓度,将缺血性卒中按照TOAST分型分为不同临床亚组--动脉粥样硬化性脑血栓形成组,腔隙性脑梗死组,心源性脑栓塞组以及其他或不明原因脑梗死组,并分别与健康组进行对照研究。结果：血浆同型半胱氨酸平均水平在动脉粥样硬化性脑梗死组患者为（16.19±4.35）μmol/L,腔隙性脑梗死患者为（16.89±6.41）μmol/L,心源性脑栓塞组为（18.23±4.83）μmol/L,其他或不明原因脑梗死患者为（17.31±2.56）μmol/L,脑出血组患者为（14.91±4.54）μmol/L,均高于对照组（7.20±7.91）μmol/L,P〈0.05;各缺血性卒中组间同型半胱氨酸水平差异无显著性（P〈0.05）;缺血性卒中组患者血浆同型半胱氨酸水平高于出血性卒中组（P〈0.05）。卒中各组叶酸和维生素B12浓度均显著低于对照组（P〈0.05）。结论：血浆同型半胱氨酸在不同类型卒中中均升高,高血浆Hcy水平可能是脑卒中的独立危险因素,叶酸和VitB12缺乏可能是导致高Hcy血症的重要原因。     

应用基于适配器连接介导的等位基因特异性扩增法检测LRRK2基因的单核苷酸多态性

目的：应用基于适配器连接介导的等位基因特异性扩增法（Adapter Ligation—mediated Allele-specific Amplification,简称ALM-ASA）技术,检测与帕金森病（PD）发病相关的LRRK2基因中的4个SNP位点（6055G〉A,7153G〉A,4321C〉T和2264C〉T）,探讨该法用于筛查帕金森病相关SNP位点的可行性,研究多个SNP住点同时检测的准确性和可靠性。方法：运用ALM—ASA法原理,改进使用多重PCR法代替单一预扩增法,使用4对引物在单管中预扩增含所待测SNP位点的四段片段,通过酶切、酶连和PCR特异性扩增检测判断SNP的类型。经PCR体外定点突变实验制备的相应位点的突变阳性片段,检验方法的准确性和可靠性。结果：采用该法成功测定了20名PD病人和20名健康中国人的LRRK2基因中最受关注的4个SNP位点的多态性。并随机对其中10分样本的检测结果以测序法检测进行验证,结果完全一致。结论：ALM-ASA法极大提高了PCR反应的特异性,是一种准确、可靠,且费用低廉的SNP筛查方法,可推广应用于临床和实验室进行与PD有关的单核苷酸多态性的筛查检测。     

BDNF RNA干扰在多巴胺能PC12细胞凋亡中的作用研究

目的：探讨脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）在PC12细胞凋亡中的作用。方法：设计并合成针对BDNF mRNA序列的小片段干扰RNA（siRNA）,利用lipofectamine 2000将siRNA转染入PC12细胞中或给与6-OHDA损伤,给与/不给予BDNF蛋白保护,采用定量PCR和免疫荧光法检测BDNF mRNA和蛋白表达水平;采用上清液乳酸脱氢酶（LDH）释放量测定和流式细胞仪法检测siRNA对细胞凋亡的影响。结果：转染siRNA的细胞的BDNF mRNA的表达量比正常组细胞减少73%,而转染作为对照的scrambled siRNA的细胞的BDNF mRNA的表达没有明显变化。BDNF RNA干扰与6-OHDA神经毒性一样可诱导PC12细胞的LDH释放和细胞凋亡。给予BDNF蛋白保护后细胞毒性减轻。结论：BDNF基因下调可以导致PC12细胞的凋亡,BDNF蛋白对PC12细胞有保护作用,为进一步进行动物体内研究奠定了基础。     

Akt与细胞生存

细胞死亡包括坏死和凋亡两种方式,抑制凋亡,促进细胞生存巳成为当前研究的热点。PI-3K/Akt信号转导通路在生长因子介导的细胞生存中发挥了重要作用,Akt的激活能够阻断许多刺激因子所诱导的细胞凋亡。     

不同剂量脉络宁注射液对脑缺血-再灌注损伤的治疗作用

目的:探讨不同剂量脉络宁注射液对SD大鼠脑缺血-再灌注损伤的治疗作用,并探索最佳给药剂量.方法:将45只SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组、缺血-再灌注(I-R)组、低剂量组(20 g·Kg-1·d-1)、中剂量组(40 g·Kg-1·d-1)和高剂量组(80 g·Kg-1·d-1).每组各9只.采用Longa法制作脑缺血-再灌注模型.造模成功后6 h进行神经功能评分.低、中、高剂量组分别给予相应剂量脉络宁注射液,每天一次,连用7d.注射体积为1.5 ml.假手术组和缺血-再灌注组给予相应体积的等渗盐水.所有大鼠14d后评分、取材.流式细胞仪检测大鼠海马凋亡细胞,电镜观测海马CA1区神经元细胞超微结构.结果:各治疗组神经功能评分与缺血-再灌注组比较差异有显著统计学意义(P<0.01);低剂量组与中、高剂量组比较有统计学差异(P<0.05);各治疗组凋亡细胞数与缺血-再灌注组比较有较明显统计学差异(P<0.01);低剂量组与中、高剂量组比较亦有较明显差异(P<0.01).治疗组大鼠海马CA1区神经元超微结构较缺血.再灌注组明显改善;而中、高剂量组海马CA1区神经元超微结构较低剂量组有明显改善.结论:脉络宁注射液对脑缺血-再灌注损伤具有治疗作用,并通过抑制神经细胞凋亡、促进神经细胞恢复改善预后.且以中等(40g·Kg-1·d-1)以上剂量效果最好.     

依达拉奉联合巴曲酶对沙土鼠缺血-再灌注神经保护作用的影响

目的:探讨巴曲酶不同用药次数联合依达拉奉对沙土鼠缺血再灌注(I/R)损伤后脑保护作用的影响.方法:42只沙土鼠,随机分为I/R组,假手术组,对照组,依达拉奉联合巴曲酶组(分3个亚组).采用双侧颈总动脉夹闭5 min后再通建立沙土鼠脑I/R损伤模型.联用组注射依达拉奉(10mg/kg),12h1次,同时注射巴曲酶(8BU/kg),q.o.d,分别给药3次、5次、7次;对照组注射等量依迭拉奉,同时注射生理盐水,剂量同巴曲酶,q.o.d,共7次;I/R组、假手术组注射等量生理盐水.检测各组沙土鼠CA1区凋亡细胞率及脑组织超氧化物岐化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量.结果:①联用组CA1区凋亡细胞率明显少于I/R组和对照组(均P＜0.05);联用≥5次各组CA1区凋亡细胞率明显少于联用3次组(P＜0.05);②脑组织SOD活力和MDA含量:联用组和对照组与I/R组比较差异有显著性(均P＜0.05);联用≥5次各组与联用3次组和对照组比较差异有显著性(P＜0.05).结论:依达拉奉联合巴曲酶显著减少缺血再灌注脑损伤后神经细胞凋亡,增强缺血脑组织SOD活力、降低MDA含量,且随联用巴曲酶用药次数增加(＞3次)从而具有更强的脑保护作用.