20-羟基蜕皮甾酮对大鼠全脑缺血再灌注后海马神经元损伤和炎症反应的影响

目的:观察20-羟基蜕皮甾酮对全脑缺血再灌注后SD大鼠海马神经元和认知功能的保护作用,并探讨其相关机制。方法:采用四血管闭塞法建立SD大鼠全脑缺血再灌注模型,脑电图和脑组织Nissl染色评估模型的可靠性。将实验动物分为假手术组,缺血再灌注组和缺血再灌注+20-羟基蜕皮甾酮组。TUNEL染色观察海马神经元凋亡,Morris水迷宫实验评价大鼠的认知功能,酶联免疫法测定缺血再灌注后3-24小时大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度。结果:全脑缺血再灌注后大鼠海马神经元凋亡率从4.50±1.90%上升至72.90±8.40%(p0.01),给予20和40 mg/kg 20-羟基蜕皮甾酮干预,大鼠海马神经元凋亡率分别下降至51.40±8.60%(p0.05)和42.70±6.80%(p0.01)。与假手术组相比,全脑缺血再灌注后大鼠在Morris水迷宫定位航行试验中逃避潜伏期明显延长(p0.01),在空间探索试验中目标象限停留时间和穿越目标象限次数明显减少(p0.01),而20-羟基蜕皮甾酮显著抑制上述变化,改善大鼠的认知功能。缺血再灌注后3-24小时,大鼠血清中IL-1β和TNFα浓度较假手术组显著升高,20-羟基蜕皮甾酮能抑制上述各时间点大鼠血清中IL-1β和TNFα浓度的升高。结论:20-羟基蜕皮甾酮对全脑缺血再灌注后大鼠海马神经元和认知功能有显著保护作用,抑制缺血再灌注后的炎症反应是其保护机制之一。     

宝天曼自然保护区不同针叶树径向生长对气候的响应

树木年轮资料能够提供区域内过去长时间的环境和气候信息,成为获取过去气候变化信息的重要手段之一。利用采自宝天曼自然保护区的两种针叶树种油松和华山松树木年轮样本分别建立了油松和华山松树轮宽度标准年表PT和PA,并将油松和华山松样本合并建立了联合树种的区域年表(RC)。3种年表分别与不同气候要素(月平均气温、月平均最高气温、月平均最低气温、月降水量)及其不同月份组合进行相关分析,结果表明,油松年表PT和华山松年表PA都包含较高的气候信息,且都和生长季不同月份温度显著负相关和降水显著正相关。其中,油松和华山松都与当年4月和5月降水显著正相关,油松还与当年5月的平均最高温度和上年11月最低温显著负相关,与当年3月平均最低气温显著正相关;华山松与上年10月和当年4月的平均最高温度显著负相关,与上年12月和当年7月平均最低温度显著正相关;联合年表RC包含了单个年表PT和PA共同的气候信息,与当年4—5月降水和3月最低温显著正相关,与当年7月最低温和4、5月最高温显著负相关。不同年表与生长季(3—8月)内气候要素月份组合的相关分析也表明联合年表RC包含和单物种年表PT、PA相似的气候信息并加强了PT、PA受当年生长季气候变化影响的公共信号。可见,同一地区的多树种联合年表一定程度上能体现出区域性树木生长对气候变化响应的生态生理特征,为同地区建成多树种联合年表来探讨当地区域性气候变化提供了可行性的理论基础和一定的参考作用.     

脑卒中患者医院获得性肺炎的病原菌分布及药敏分析

目的:分析脑卒中患者医院获得性肺炎的病原菌分布及药敏性,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法:收集2013年3月-2015年9月我院收治的109例脑卒中并发医院获得性肺炎的临床资料,采用无菌方法收集患者晨痰或者下呼吸道分泌物进行细菌培养,并对阳性病原菌进行药物敏感性试验。结果:对痰标本或者是下呼吸道分泌物进行细菌培养187次,培养阳性152次,阳性率为81.28%,共培养出病原菌283株,其中革兰阴性菌192株占67.84%,革兰阳性菌76株占26.86%,真菌15株占5.30%。革兰阴性菌中的肺炎克雷伯菌,鲍氏不动杆菌,大肠埃希菌,铜绿假单胞菌,阴沟肠杆菌对头孢噻肟,头孢呋辛,美洛西林,美洛西林,头孢呋辛和头孢噻肟的耐药率最高,分别为66.18%,65.31%,70.97%,64.00%,71.43%;对氯霉素,哌拉西林/他唑巴坦,氯霉素,头孢吡肟,氯霉素的耐药率最低,分别为1.47%,6.12%,3.23%,8.00%,7.14%。革兰阳性菌中的金黄色葡萄球菌,肺炎链球菌,粪肠球菌对万古霉素,万古霉素,氨苄西林的耐药率最高,分别100.00%,90.00%,84.62%;对红霉素,红霉素,红霉素的耐药率最低,分别为5.26%,0.00%,0.00%。结论:革兰阴性菌是脑卒中患者医院获得性肺炎的主要病原菌,病原菌耐药性高且存在耐多药现象,临床应合理选用抗菌药物进行治疗。     

基于18S rRNA、COⅡ基因的?鱼(Miichthys miiuy)系统发育分析

为了解鮸鱼的系统发育地位,探索18S rRNA、COⅡ分子标记对石首鱼科系统分类的适用性,对鮸鱼的18S rRNA基因、线粒体COⅡ基因进行克隆、序列分析和构建NJ系统进化树。结果表明:扩增得到鮸鱼18S rRNA基因1305 bp,A+T含量为46.2%;COⅡ基因序列为854 bp,A+T含量为53.5%,有明显的反G偏倚(15.2%),含一个699 bp的ORF,编码233个氨基酸;基于18S rRNA序列构建的系统树显示,鲈形目鱼类聚为一个紧密的簇,该目中各科鱼类间18S rRNA序列的同源性均大于97.8%,无法反映鮸鱼在石首鱼科中的系统发育情况。基于COⅡ序列构建的系统树显示,鲈形目鱼类分为2簇:包括鮸鱼在内的所有石首科鱼类聚为一个大簇,其他各科聚为另一个大簇;其中鮸鱼与黄唇鱼亲缘关系最近,二者序列相似性为97.4%。虽然石首科鱼类聚成的簇中有些分支的自展支持率较低(<50%),个别种类的聚类与传统分类有所差异,但大部分聚类是一致的。结果既能丰富鮸鱼的分子系统学资料,又可为研究鮸鱼的系统发育地位及石首鱼科鱼类的进化关系提供参考资料。     

中药活性物质的提纯及抗SARS病毒的研究

首次利用逆流色谱,对黄芩、甘草和金银花等中药中的生物活性物质进行提取、纯化,黄芩甙、甘草甜素和绿原酸的纯度分别为96．5％,95．2％和94．8％,通过对10个SAILS冠状病毒临床分离株在胎体恒河猴腰4细胞和Vero—E6细胞的中和试验和斑块缩小试验,研究三种纯品在培养48和72h的抗SARS病毒活性。结果表明黄芩甙抑制SARS病毒活性效果明显,甘草甜素具有一定的效果,而绿原酸的效果较差。     

小麦TILLING分析中CELⅠ酶切及PCR反应体系的优化

在小麦中建立稳定的基于CELⅠ酶切的目的基因突变位点检测技术,有助于高通量鉴定目的基因片段的点突变及提高突变检测效率。本研究以冬小麦品种新麦18空间诱变SP2群体为材料,以小麦糯质基因Waxy为目标片段,通过优化基因组DNA提取方法、调整PCR反应体系中dNTP、Mg2+及引物浓度、改变目标片段CELⅠ酶切缓冲液成分,以及调整纯化过程中的空气相对湿度等方式,优化了小麦TILLING技术体系。在利用PVP-40法提取DNA过程中,研磨器振动频率提高到30/s,KAc溶液的反应时间延伸为20min时,基因组DNA质量和纯度最佳;在设定的浓度范围内dNTP和Mg2+浓度对产物影响差异不明显,均能高效扩增出目的条带。引物浓度对产物影响差异显著,最佳引物浓度为0.4μmol/L。20μl酶切体系中,最佳CEL I酶浓度为0.1U且利用超纯水代替CELⅠ缓冲液。最终在小麦中建立起了基于CELⅠ酶切的高通量TILLING筛选技术体系。     

人Stathmin基因siRNA腺病毒载体的构建及病毒鉴定

目的:为了寻求解决非特异性杀伤作用的星形细胞瘤的基因治疗问题的新途径.本研究构建带有Stathmin siRNA的复制缺陷腺病毒载体并包装病毒.方法:(1)两个目标siRNA基因片段合成并分别插入pSilencer4.1-CMV载体中从而构建两个重组真核表达栽体:pSilencer4.1-CMV-S1和pSilencer4.1-CMV-S2.(2)用EcoR Ⅰ和BamH Ⅲ双酶切pSilencer4.1-CMV-S1和pSilencer4.1-CMV-S2,将目的片段分别装进穿梭质粒,从而构建pShuttle-CMV neo-S1和pShuttle-CMV neo-S2.以独特的限制性内切酶PI-Sce Ⅰ合I-Ceu Ⅰ双酶切这两个穿梭质粒并重组至骨架Adeno-XTM Viral DNA上.并以PCR方法来鉴定.(3)线性化Ad-pShuttle-CMV neo-S1和Ad-pShuttle-CMV neo-s2并转染入HEK293细胞,出毒后进行PCR毒种鉴定和滴度分析.结果:(1)酶切分析和DNA测序表明,小干扰RNA片段的成功连接到pSilencer4.1-CMV载体上分别.(2)酶切分析表明两个目的基因片段,都分别成功连接入穿梭载体pShuttle.PCR表明pShuttle-CMV neo-S1和pShuttle-CMV neo-S2分别与骨架重组成功.(3)腺病毒DNA进行PCR鉴定后表明成功地在体外重组并生产出腺病毒.且冻融产毒细胞保证了较高的重组腺病毒滴度.结论:Adeno-XTM系统是一个能简单而有效生产能表达目的基因腺病毒的系统.我们构建的腺病毒有望成为星形细胞瘤新的高效而安全的治疗方法.     

氧化应激与癫痫发作

由过量自由基释放导致的氧化应激参与了多种神经退化性疾病的病理过程。然而,氧化应激和癫痫之间的关系最近才得到认可。积累的证据证明氧化应激作为一个关键因素不仅是癫痫发作的后果,而且可能参与了癫痫发生。因此,旨在降低氧化应激的抗氧化治疗最近在癫痫治疗中引起相当的关注。然而,许多资料表明在所有的癫痫发作模型中氧化应激的表现特征不尽相同。这篇综述回顾了不同的动物癫痫模型(比如,红藻氨酸、匹鲁卡品、戊四氮),急性和慢性氧化应激的产生和影响,认为它对蛋白、脂质和抗氧化防御系统产生危害,这篇综述并且分析了癫痫发作中氧化应激产生的可能原因。提示抗氧化治疗可能可以作为缓解癫痫发作和保护损伤神经元的方法。     

猪IL-18 在杆状病毒/昆虫细胞中的表达

IL-18作为一种多效性细胞因子,在机体免疫应答及各种生理功能中发挥着重要的调节作用,根据猪IL-18基因序列设计1对引物,将编码猪IL-18的成熟蛋白基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual中,并在C端融合6个组氨酸标签以利于纯化,然后转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用。将重组质粒转染昆虫细胞,SDS-PAGE可检测到分子量为18 kDa左右的重组蛋白,Western blotting证实该重组蛋白可与兔抗猪IL-18抗体发生特异性反应。纯化后蛋白能明显促进猪T淋巴细胞转化,表明所表达的IL-18具有较高的生物活性。此研究为进一步开发研制新型免疫佐剂奠定了基础。     

TILLING技术在作物突变研究中的应用现状与前景

定向诱导基因组局部突变(Targeting Induced Local Lesions In Genomes,TILLING)技术将化学诱变与高通量突变检测技术相结合,可高效、快速地从突变群体中鉴定出目标基因突变位点。本文在概述TILLING技术应用于水稻、小麦、玉米、大豆等作物突变研究现状基础上,重点综述了TILLING分析群体构建与突变位点检测方法的技术改进与发展,探讨了TILLING技术目前存在的问题与前景。