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| 小麦TILLING分析中CELⅠ酶切及PCR反应体系的优化 | |
| 引用本文： | 潘 娜,郭会君,赵世荣,赵林姝,古佳玉,李军辉,王广金,徐荣旗,刘录祥.小麦TILLING分析中CELⅠ酶切及PCR反应体系的优化[J].植物遗传资源学报,2012,13(5):830-837. |
| 作者姓名： | 潘 娜 郭会君 赵世荣 赵林姝 古佳玉 李军辉 王广金 徐荣旗 刘录祥 |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院作物科学研究所/国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程/国家农作物航天诱变技术改良中心,北京,100081 2. 黑龙江省农业科学院生物技术研究所,哈尔滨,150086 3. 中国农业科学院生物技术研究所,北京,100081 |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)项目,农业部农业公益性行业科研专项,国家自然基金项目,国际原子能机构项目,哈尔滨市学科带头人项目 |
| 摘 要： | 在小麦中建立稳定的基于CELⅠ酶切的目的基因突变位点检测技术,有助于高通量鉴定目的基因片段的点突变及提高突变检测效率。本研究以冬小麦品种新麦18空间诱变SP2群体为材料,以小麦糯质基因Waxy为目标片段,通过优化基因组DNA提取方法、调整PCR反应体系中dNTP、Mg2+及引物浓度、改变目标片段CELⅠ酶切缓冲液成分,以及调整纯化过程中的空气相对湿度等方式,优化了小麦TILLING技术体系。在利用PVP-40法提取DNA过程中,研磨器振动频率提高到30/s,KAc溶液的反应时间延伸为20min时,基因组DNA质量和纯度最佳;在设定的浓度范围内dNTP和Mg2+浓度对产物影响差异不明显,均能高效扩增出目的条带。引物浓度对产物影响差异显著,最佳引物浓度为0.4μmol/L。20μl酶切体系中,最佳CEL I酶浓度为0.1U且利用超纯水代替CELⅠ缓冲液。最终在小麦中建立起了基于CELⅠ酶切的高通量TILLING筛选技术体系。 |
| 关 键 词： | 小麦 TILLING CELⅠ 优化 糯质基因Waxy |
| 收稿时间： | 2011/10/19 0:00:00 |
| 修稿时间： | 6/25/2012 3:45:01 PM |
Establishment and Optimization of CEL I-based TILLING for Wheat |
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| PAN Na , GUO Hui-jun , ZHAO Shi-rong , ZHAO Lin-shu , GU Jia-yu , LI Jun-hui , WANG Guang-jin , XU Rong-qi , LIU Lu-xiang.Establishment and Optimization of CEL I-based TILLING for Wheat[J].Journal of Plant Genetic Resources,2012,13(5):830-837. | |
| Authors: | PAN Na GUO Hui-jun ZHAO Shi-rong ZHAO Lin-shu GU Jia-yu LI Jun-hui WANG Guang-jin XU Rong-qi LIU Lu-xiang |
| Institution: | 1(1 Institute of Crop Sciences,Chinese Academy of Agricultural Sciences/National Key Facility for Crop Gene Resources and Genetic Improvement/National Center of Space Mutagenesis for Crop Improvement,Beijing 100081; 2Biotechnology Research Institute,Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150086; 3Biotechnology Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100081) |
| Abstract: | |
| Keywords: | Wheat TILLING CEL I Optimization Waxy gene |
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