鸭梨α-法尼烯合成酶基因双链RNAi表达载体的构建

目的：为了在转基因鸭梨植株中有效抑制转录后α-法尼烯合成酶基因（PFS）的表达,研究了α-法尼烯合成酶基因双链RNAi载体的构建。方法：利用RT—PCR技术,从鸭梨的果皮中获得了来源于PFS编码区的2个基因片段,反向连接,构建成RNAi载体。结果：经PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,所构建的载体其序列与设计相一致。结论：克隆质粒pMD-L-S构建成功,为借助农杆菌介导法将PFS基因转化到鸭梨再生植株中奠定了基础。     

梨α-法尼烯合成酶基因的克隆及其序列分析

利用RT-PCR技术从鸭梨的果皮中获得了一个全长为1824bp的α-法尼烯合成酶基因(α-Farnesene Synthase,PFS)克隆,该cDNA包含一个由1728个核苷酸组成的开放阅读框架,编码分子量约66kDa的576个氨基酸残基的蛋白质。序列相似性分析结果表明,它与苹果中克隆到的AFS1基因具有很高的同源性,核苷酸序列一致性为97.34%,且具有典型的萜类合成酶基因保守结构域。与来源于黄瓜、杉树、松树的α-法尼烯合成酶基因的同源性较低。     

苹果虎皮病的综合防治

苹果虎皮病是某些品种苹果在低温贮藏的中后期发生的一种最严重的生理性病害。该病的主要症状是在果面上（通常是绿色部分）出现不规则且凹陷的褐色至深褐色病斑。发病初期病斑面积较少,皮下果肉组织正常;发病后期病斑可延至整个果面,部分果肉也变褐。病果极易染菌而腐烂,常造成重大经济损失。目前我国栽培的许多苹果品种易发生虎皮病,如新红星、红星、国光、青香蕉苹果等。近年来我国苹果产贮量逐年增加,为提高贮后苹果质量、延长苹果贮期,有必要加强虎皮病的防治工作。目前可以采用以下技术来防治虎皮病的发生。1．首先采取合理的…     

苹果中α-法尼烯的代谢途径及其分子调控

概述了苹果中α-法尼烯在虎皮病诱导和昆虫诱导中的作用、代谢途径及其分子调控机制,尤其是3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)对其合成的调控.     

苹果α-法尼烯合成酶基因双链RNAi载体的构建

RNA干扰属于转录后后基因基因沉默机制(PTGS),是一种新型的基因沉默手段,用于基因表达和功能的研究。以成熟苹果的果皮RNA为模板,经RT-PCR扩增并克隆α-Farnesene合成酶基因(AFS),设计特异引物从AFS基因中扩增515bp和396bp的反义和正义基因片段,将正义和反义基因片段串联,把构成的长为911bp的DNA插到PBI121表达载体中,构建成可表达α-Farnesene合成酶双链RNA载体PBI-AFS。     

冷藏苹果阴阳面果皮超微结构和虎皮病的发生

用电镜观察了在0℃贮藏4个月和在20℃室温发病后红星苹果(Mains p1L’,llLtl ill。)阴阳面果皮的超微结构。发现苹果果实角质层中电子密集物与虎皮病的发生有密切关系。该电子密集物可由角质层沿细胞壁向内层细胞移动,在接触到细胞时细胞质膜解体,内部结构破坏,并可进人细胞内部,增大细胞的电子密度。推测该电子密集物可能是a一法尼烯氧化反应后的混合物。冷藏结束时,果实阴阳面均无虎皮病发生。果实阳面细胞内部结构较好,内层细胞胞壁电子密集物少,而果实阴面有的表皮细胞已解体,内层细胞胞壁电子密集物多。在果实阴面发病后,阳面仍未发病。果实阳面细胞内部结构仍较好,只少数下皮外层细胞被破坏,而果实阴面果皮细胞已解体,电子密度增加。研究认为,角质层中电子密集物可从表皮、下皮细胞外部伤害细胞。     

梨萜类合成酶基因家族生物信息学与表达模式分析

萜类合成酶(Terpene synthases,TPS)是萜类化合物合成过程中的关键酶。基于梨(Pyrus bretschneideri)全基因组数据库,采用生物信息学和分子生物学方法,对梨TPS基因家族进行鉴定和亚家族分类,研究梨TPS基因的结构及编码蛋白质性质和表达模式。共鉴定获得33个萜类合成酶基因家族成员,聚类为5个亚家族,其中,TPS-a亚家族成员数量最多,包含4-7个外显子;主要定位于细胞质,少数分布在线粒体、叶绿体和内质网等;梨TPS蛋白均为亲水性蛋白,α-螺旋和无规卷曲是其二级结构主要组成元件,β-折叠和延伸链散布其中;TPS-a中保守基序个数相对较多,TPS-e/f相对较少;各亚族内蛋白质在三级结构上高度相似。除PbrTPS24外,其余9个TPS基因在根、茎、幼叶和幼芽中均有表达,并且不同的基因在不同部位高表达,PbrTPS存在组织特异性表达。     

法呢基焦磷酸(FPP)的生物合成及其分子调控

法呢基焦磷酸合酶作为异戊二烯途径中的重要调节酶,是许多萜类物质的合成前体。FPS的cDNA克隆在许多生物体中也已得到了分离并进行了表达特性研究。从FPP的生物合成途径入手,对FPP生物学特性、FPS酶基因调控的相关信息进行了综述,同时对FPS在基因工程方面的应用进行了展望。     

鸭梨中α-法尼烯合成酶基因分离与表达分析

研究α-法尼烯合成酶基因的表达特性,了解鸭梨虎皮病发生的分子基础.应用高效液相色谱(HPLC)法检测鸭梨果皮中α-法尼烯含量;经过RT-PCR扩增首次得到了1 824 bp鸭梨α-法尼烯合成酶基因(GenBank注册号DQ364626),使用Northern杂交法检测了该基因的表达特性.PFS基因在鸭梨果皮中的表达量最高,叶中的次之,茎、花、根中的表达量相对较低;二苯胺(DPA)推迟而1-甲基环丙烯(1-MCP)抑制了低温冷藏的鸭梨果皮中PFS基因的表达和α-法尼烯的释放.α-法尼烯的积累量与PFS基因的表达量之间存在很高的协同性.