不同食细菌线虫取食密度下线虫对细菌数量、活性及土壤氮素矿化的影响

采用悉生培养微缩体系,探讨了不同食细菌线虫取食密度下线虫(Caenorhabditis elegans) 对细菌(Bacillus subtilis)数量和活性及土壤氮素矿化的影响.结果表明,线虫对细菌的取食,促进了细菌的增殖,并在不同线虫取食密度下对细菌的增殖促进作用总体表现为:接种20条·g^-1＞10条·g^-1＞40条线虫·g^-1处理.线虫在促进细菌增殖的同时,明显提高了土壤呼吸强度和土壤蔗糖酶、脲酶和磷酸酶的活性,但不同取食密度处理间差异不明显.线虫与细菌之间的相互作用显著提高了土壤铵态氮和矿质态氮含量,促进了土壤氮的矿化.不同取食密度处理间,线虫对土壤氮素矿化的促进作用与对细菌的增殖促进作用趋势一致.     

产纳豆激酶菌株Bacillus sp.ZLK08的分离及酶纯化

获得稳定产纳豆激酶菌株,为高酶活纳豆激酶产生菌的改造奠定基础.取各来源纳豆,用平板梯度稀释法分离菌株,测定菌株酶活,利用16S rDNA鉴定产酶菌株,凝胶过滤法纯化纳豆激酶并SDS-PAGE检测分析.成功获得稳定产酶芽胞杆菌Bacillus sp.ZLK08,16S rDNA分析表明其与GenBank中序列同源率达到99％,液体发酵表明酶活达到2.5 FU/mL,经纯化,SDS-PAGE表明纳豆激酶分子量为28.46 ku.分离出的Bacillus sp.ZLK08菌株能稳定产纳豆激酶且具有较高酶活.     

三七总皂苷对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织的凋亡抑制作用

目的:探讨三七总皂苷(PNS)对大鼠脑缺血再灌注损伤后大脑皮层细胞的凋亡抑制作用.方法:采用大脑中动脉栓塞再通法建立脑缺血再灌注模型,将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和三七总皂苷治疗组;根据再灌注时间不同分为再灌注10h、12 h、24h组,缺血时间为90 min.大鼠脑缺血再灌注10h、12h和24h不同时间点进行神经功能评分,采用原位末端标记法检测神经细胞凋亡情况,同时用免疫组化法检测抑制凋亡蛋白XIAP和促凋亡蛋白Smac阳性细胞数.结果:缺血再灌注组神经细胞凋亡数明显增加,XIAP蛋白的表达呈先高后低的变化(P＜0.05),Smac蛋白的表达明显上升(P＜0.05);PNS治疗组能明显减少脑皮层组织神经细胞凋亡数(P＜0.05),增加XIAP蛋白表达(P＜0.05),减少Smac蛋白表达(P＜0.05).结论:PNS可能通过促进抑制凋亡蛋白XIAP的表达和抑制促凋亡蛋白Smac的表达,减少脑组织缺血再灌注损伤后的神经细胞凋亡,进而对再灌注后脑组织具有抑制脑细胞凋亡的作用.     

重症肺炎患儿suPAR水平对比分析及与影像学表现的相关性

摘要 目的：探讨重症肺炎患儿可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体（soluble urokinase-type plasminogen activator receptor,suPAR）水平并对比分析及与影像学表现的相关性。方法：选取贵阳市第二人民医院及贵阳市儿童医院2020年1月到2020年12月共收治的70例肺炎患儿作为研究对象,其中重症肺炎患儿35例,男22例、女13例,将其分为重症组,轻症肺炎患儿35例,男20例、女15例,将其分为轻症组。对比两组患儿的suPAR水平、心肌酶水平以及肺部影像学结果,了解suPAR在重症肺炎中是否具有敏感性及特异性,并分析重症肺炎suPAR水平与心肌酶、肺部影像学结果是否存在相关性。结果：重症组suPAR水平较轻症组明显升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）,重症组患儿肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzymes-MB,CK-MB）、肌酸激酶（creatine kinase,CK）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）心肌酶相关指标明显高于轻症组,差异具有显著性（P＜0.05）;两组患儿密度增高影、带片絮状影、节段性实变、斑片状影人数对比无明显差异（P＞0.05）,两组患儿肺不张、大片状影、双肺纹增多人数对比差异显著（P＜0.05）;suPAR水平与CK-MB、CK、LDH、AST以及影像学特征呈正相关（P＜0.05）。血清suPAR水平对重症肺炎病情危重程度ROC的AUC为0.897（95%CI：0.819~0.975）,最佳cutoff值为1.9 ng/mL,此时特异度、灵敏度为82.86 %、85.71 %。结论：重症肺炎组suPAR的值与心肌酶呈正相关;suPAR水平与影像学表现具有相关性;suPAR水平越高提示病情越危重,在重症肺炎评估中其敏感性及特异性增高。     

β-内酰胺酶耐药基因blaOKP进化及其侧翼序列特征研究

为研究β-内酰胺酶耐药基因bla_OKP进化及其侧翼序列情况,本文通过全基因组测序技术对肺炎克雷伯氏菌进行测定,分析了其中bla_OKP基因及其侧翼序列的特征,同时与不同亚型的bla_SHV侧翼序列进行了对比。研究发现,bla_OKP、bla_SHV基因进化差异明显,分为两个进化支,其中bla_OKP分为两个进化亚组(bla_OKP-A和bla_OKP-B)。侧翼序列分析结果表明,bla_OKP基因的侧翼序列中无可移动遗传元件,与染色体介导的基因bla_SHV的侧翼序列结构相似,但存在差异,主要表现为bla_OKP基因的一侧与KdpC相连,bla_SHV基因的一侧与RecF相连并具有ygbN-ygbM-ygbK结构。同时由质粒介导的bla_SHV基因的两侧存在多种可移动遗传元件。这些结构差异可能是导致bla_OKP耐药基因进化缓慢的原因之一。本研究通过对bla_OKP基因及其侧翼序列特征进行研究, 研究发现bla_OKP基因及其侧翼序列结构保守是其相对bla_SHV基因进化速度缓慢的重要原因。     

应用RNA干扰技术调节大鼠c-jun基因的表达

目的:应用RNA干扰(RNAi)技术调节大鼠c-jun基因在Cos-7细胞中的表达.方法:分别构建大鼠c-jun基因的RNA干扰载体和真核表达GFP(绿色荧光蛋白)载体,将两者共转染Cos-7细胞,镜下观察大鼠C-Jun-GFP融合蛋白的表达,应用Western blot方法检测抑制效率.结果:酶切和测序结果表明,大鼠c-jun基因的RNA干扰载体和真核表达GFP载体构建成功,镜下及Western blot共转染结果均显示随着RNA干扰载体浓度的增加C-Jun-GFP融合蛋白表达量逐渐减少.结论:在Cos-7细胞中应用RNAi技术成功调节大鼠c-jun基因的表达.     

一种获取精确胚胎天数鼠脑皮质神经细胞原代培养方法

目的:探讨获取精确胚胎天数鼠脑皮质神经细胞原代培养方法.方法:首先将性成熟雌雄SD大鼠1∶1合笼于代谢饲养盒内,次日观察有无阴栓(同时做阴道涂片),若有记为E0.取E17孕鼠断颈处死,无菌状态下取出子宫,剥离羊膜与胚外膜,取得胚胎.胚胎断头,在解剖显微镜下用尖镊沿双眼、小脑和脑干腹侧切取大脑皮质,用0.125％胰酶进行温和消化,采用MEM加10％胎牛血清、10％马血清和1％ L-Glutamine混合培养基,用0.73 MPoly-L-Omithine Hydrobromide处理的培养板入37℃,10％CO2孵箱内培养.结果:雌鼠一次可排出阴栓3-5个不等,阴栓为奶黄色、锥体形、质韧.同时做阴道涂片可见活动精子;获取得胚胎脑皮质细胞呈贴壁生长,其胞体饱满,折光性好,突起明显,与周围细胞形成网络连接.结论:用阴栓并精子涂片判断胚胎胎龄简便而准确;E17胚胎适宜体外培养获得脑皮质细胞;组合培养基加处理过的培养板和10％ CO2孵箱浓度的新方法获得了状态良好的脑皮质神经细胞.     

大熊猫源大肠杆菌及肺炎克雷伯氏菌对消毒剂耐药性研究

本实验对大熊猫肠道分离的88株大肠杆菌、32株肺炎克雷伯氏菌对季铵盐类消毒剂BC、CTPC、CTAB及DDAC的最小抑菌浓度(MIC)值进行测定,并扩增了消毒剂的耐药基因。结果显示,大肠杆菌对季铵盐类消毒剂MIC值为:BC的MIC值介于8~128 mg/L;CTPC的MIC值在32~256 mg/L之间;CTAB的MIC值为64~512 mg/L;DDAC的MIC值介于8~128 mg/L。肺炎克雷伯氏菌对季铵盐类消毒剂的耐药情况为:BC的MIC值介于16~512 mg/L;CTPC的MIC值在64~256 mg/L之间;CTAB的MIC值介于128~512 mg/L;DDAC的MIC值介于8~64 mg/L。可见,肺炎克雷伯氏菌对季铵盐类消毒剂的MIC值要大于大肠杆菌对季铵盐类消毒剂的MIC值。耐药基因检测结果表明,大肠杆菌季铵盐类消毒剂的染色体型耐药基因扩增率为68.18%~98.86%,最高为sug E(98.86%),emr E最低(68.18%),没有检测出qac E、qac F、qac G,检出率最高的可移动遗传元件介导耐药基因为qac EΔ1(19.31%)。肺炎克雷伯氏菌的染色体型耐药基因检出率为13.64%~28.41%,ydg E最高(28.14%),emr E检出率最低(13.64%),可移动遗传元件介导耐药基因sug E(p)检出率最高(6.82%),qac EΔ1、qac F、qac G基因未检出。测定大熊猫源大肠杆菌及肺炎克雷伯氏菌对消毒剂的耐药性,对圈养大熊猫消毒剂的规范使用,防控大熊猫细菌性疾病以及细菌对消毒剂耐药性有着重要意义。     

血清suPAR、PCT、CRP水平在小儿重症肺炎鉴别诊断中的效能分析

摘要 目的：分析血清可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体（soluble urokinase-type plasminogen activator receptor,suPAR）、降钙素原（procalcitoni, PCT）、C反应蛋白（C-reaction protein,CRP）水平在小儿重症肺炎鉴别诊断中的效能,以更好地评估患儿的病情严重程度,从而指导治疗及降低重症肺炎的死亡率。方法：选取贵阳市第二人民医院及贵阳市儿童医院在2020年1月至2020年12月期间收治入院的80例社区获得性肺炎患儿作为研究对象,其中轻症患儿和重症患儿各40例。检测患儿入院时白细胞计数（white blood count,WBC）、中性粒细胞（neutrophil,N）、CRP、PCT和suPAR水平。采用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）比较各指标对小儿肺炎病情严重程度的诊断效能。结果：重症组患儿WBC、N以及血清PCT、CRP、suPAR水平均明显高于轻症组患儿,差异具有统计学意义（P<0.05）。Pearson相关分析结果表明,血清suPAR水平与WBC、N、PCT和CRP水平均存在明显正相关性（P<0.05）。ROC曲线结果表明,血清suPAR诊断小儿肺炎病情严重程度的效果最佳,曲线下面积（area under curve,AUC）为0.866（95%CI：0.780~0.951）,最佳截断值为1.8,敏感度、特异度和约登指数分别为85.73 %、83.52 %和69.25 %。结论：早期检测血清suPAR能够预测小儿获得性社区肺炎病情严重程度,效果优于WBC、N以及血清PCT、CRP等指标。     

鸡蛋生产链中沙门氏菌对抗生素及消毒剂的耐药性研究

为研究鸡蛋生产链中沙门氏菌的污染情况及抗生素、消毒剂耐药情况,本文鉴定了鸡蛋生产链中分离得到的111株沙门氏菌(Salmonella)血清型,并测定了抗生素和消毒剂对沙门氏菌的最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentrations, MICs),检测了其对抗生素和消毒剂的耐药基因的表达情况。研究结果表明,沙门氏菌对甲氧苄啶(Trimethoprim, TMP)耐药率最高(N=100,P=90.09%),对阿莫西林/克拉维酸(Amoxicillin and clavulanate, AMC)、头孢噻呋钠(Sodium ceftiofur, CFS)、庆大霉素(Gentamicin, CN)敏感。沙门氏菌共产生6种不同的耐药谱型,TMP是最主要的耐药谱型(N=36,P=32.43%),52.25%的菌株(N=58)具有多重耐药性。苯扎氯铵(Benzalkonium chloride, BC)与氯化十六烷基吡啶(Cetylpyridinium chloride, CPC)对沙门氏菌的MIC的范围分别为：8~128 μg/mL、8~256 μg/mL。相对于质控菌株Escherichia coli ATCC10536,101株沙门氏菌对BC和CPC同时具有较高的耐药性(P=90.99%),109株沙门氏菌对抗生素和消毒剂具有共同耐药性(P=98.20%)。抗生素耐药基因检出率最高为blaTEM(N=49, P=44.14%),未检测出qnrA、qnrB、qepA基因,仅检测出qacEΔ1消毒剂耐药基因(N=63, P=56.76%)。抗生素耐药基因sul1和消毒剂耐药基因qacEΔ1具有显著相关性(P<0.01)。S. Derby对TMP、土霉素(Oxytetracycline, OTC)、阿莫西林(Amoxicillin, AML)、环丙沙星(Ciprofloxacin, CIP)同时表现较高的耐药性,S. Derby检出了11种抗生素耐药基因,消毒剂耐药基因qacEΔ1的检出率为81.25%(N=52)。鸡场中养殖内环境沙门氏菌对抗生素和消毒剂的耐药率以及耐药基因检出率均高于养殖外环境,鸡蛋包装、储存及销售等环节中沙门氏菌耐药率及耐药基因检出率均较高。由此可见,鸡蛋生产链中沙门氏菌对抗生素、消毒剂耐药性较严重,且存在共同耐药的现象。因此,需要进一步规范防控鸡场中沙门氏菌,规范抗生素和消毒剂的使用以及加强鸡蛋生产链条中卫生安全的监管。