34例HIV患者新生隐球菌感染分子流行病学及临床特点分析

目的了解HIV患者新生隐球菌感染的分子流行病学及其临床特点,为HIV患者新生隐球菌感染的预防和治疗提供依据。方法收集首次分离自HIV患者的新生隐球菌34株,回顾性分析患者一般资料;VITEK MS质谱仪进行菌种鉴定,ATB Fungus3测定新生隐球菌对5种抗真菌药物的MIC值;利用PCR对特异性引物扩增,确定变种和交配型;多位点序列分型(MLST)对菌株进行分子遗传学分析。结果 34株新生隐球菌绝大部分分离自中年男性,且主要来自脑脊液(73.5%)标本;初次脑脊液压力平均为(27.26±11.52)mmH2O,CD4细胞计数中位数28cells/μL(3~163cells/μL),脑脊液白细胞中位计数32(2~110)×106/L,蛋白质定量中位数为362 mg/L(160~2 730 mg/L),葡萄糖含量中位数为2.28mmol/L(1.50~5.98mmol/L);所有菌株对5种抗真菌药均敏感,且所有菌株均为Aα、VNⅠ型;MLST分析共检出3种ST型,ST5(n=32)、ST32(n=1)和ST186(n=1)。结论近两年本地区HIV合并新生隐球菌感染主要以中年男性多见,常规实验室检查缺乏特异性,对临床常用抗真菌药物耐药性不强,ST5是其感染的主要克隆系。     

幽门螺杆菌Cag致病岛hp0523基因的缺失及其对CagA蛋白转运能力的影响

摘要: 【目的】构建幽门螺杆菌Cag致病岛编码的hp0523基因缺失株,为研究hp0523基因的功能奠定基础。【方法】本研究利用同源重组原理,设计并扩增了hp0523基因上下游同源臂片段,构建hp0523基因缺失自杀质粒pBlueKM40-?hp0523,电击转化进入幽门螺杆菌后,通过抗生素筛选后并经PCR验证无误后,获得hp0523基因缺失株H. pylori 11637?hp0523;采用幽门螺杆菌与胃癌上皮细胞BGC-823共培养后,分析该基因缺失前后对细胞毒性蛋白CagA转运能力的影响;并分析比较     

幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagT基因的克隆表达及其重组蛋白对SGC-7901细胞增殖和分泌细胞因子功能的影响

[目的]初步研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)NCTC 11637 cagT(HP0532)基因对SGC-7901细胞增殖和白细胞介素-8(IL-8)分泌的影响.[方法]应用PCR技术从H.pylori基因组DNA中扩增cagT编码基因片段,将其定向插入pQE30载体中,双酶切鉴定筛选阳性克隆.测序分析确认后,IPTG诱导表达,表达蛋白以Ni2 -NTA柱进行纯化,并经Western blot鉴定,纯化的蛋白作用于SGC-7901细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR扩增IL-8,并用MTT法检测蛋白对细胞增殖的影响.[结果]成功克隆了cagT基因,全长843bp(GenBank 登录号为 EF114758),编码280个氨基酸,与GenBank公布的其他H.pylori菌株基因序列的核苷酸同源性为97%～99%.工程菌诱导后SDS-PAGE显示新生表达蛋白带,相对分子质量约为32kDa,经Ni2 -NTA柱纯化后可获得纯度为98%重组蛋白.经透析复性后的蛋白(终浓度10μg/mL)作用于SGC-7901细胞后,可诱导细胞因子IL-8在mRNA水平上的表达.不同浓度CagT蛋白与SGC-7901细胞作用,细胞增殖的程度随着蛋白浓度的增加逐渐降低,细胞的增殖受到抑制.[结论]CagT蛋白可刺激SGC-7901细胞IL-8的表达,并抑制细胞增殖,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.     

重症监护室患者血流感染菌谱构成及耐药性分析

目的 了解综合性医院重症监护室患者血流感染病原菌分布及其耐药性.方法 回顾性调查2011年6月至2012年6月南昌大学第二附属医院ICU患者血培养情况,对分离菌株及其药敏结果进行统计分析,所有数据采用WHONET 5.5软件分析.结果 1764例患者血培养共分离获得482株病原菌,总阳性率为27.32％.其中革兰阳性球菌占39.83％(192/482),革兰阴性杆菌占51.04％ (246/482),真菌占8.09％ (39/482).最常见的感染菌分别为凝固酶阴性葡萄球菌、洋葱伯克霍尔德菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌及金黄色葡萄球菌.金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的耐甲氧西林发生率分别为88.24％及90.48％,对青霉素的耐药率均为100％,未检测到耐万古霉素的葡萄球菌.金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌比较,耐药率有统计学意义的只有复方新诺明,耐药率分别为5.88％和63.49％,金黄色葡萄球菌对复方新诺明(5.88％)和夫西地酸(11.76％)耐药率较低;大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌耐药率最低的是亚胺培南,分别为13.04％及11.11％;铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率为20.00％,而鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率高达92.68％.结论 凝固酶阴性葡萄球菌、洋葱伯克霍尔德菌、鲍曼不动杆菌等是重症监护室患者血流感染的常见病原菌,其耐药及多重耐药性均较严重.     

异源表达的幽门螺杆菌cag4蛋白有溶菌糖基转移酶活性

摘要【目的】构建融合基因原核表达载体pET-28a- cag4,并表达重组融合蛋白cag4,分析重组融合蛋白的酶活性,为新型抗生素（或是抗菌药物）的研发提供作用靶位。【方法】本研究利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a- cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌 BL21(DE3)进行异源表达。利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和Western Bolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2＋-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析。【结果】在大肠埃希菌 BL21(DE3)中获得高效表达的重组蛋白; 经SDS-PAGE和Western Bolt鉴定表达后,采用Ni2＋-NTA柱在变性条件下纯化,并进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析,表明目的蛋白具有明显的肽聚糖水解活性; 通过监测浊度下降速率,比较其在不同pH条件下活性的变化,即?A/（min?mg protein）,结果表明,幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。【结论】幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。     

2013年临床分离菌耐药性分析

目的了解南昌大学第二附属医院2013年临床分离菌对抗菌药物的耐药性。方法采用纸片扩散法或自动化仪器法进行药敏试验,参照CLSI 2013年版判读结果,用WHONET5.5软件进行数据分析。结果2013年共收集非重复临床分离菌3996株,其中革兰阴性菌2 623株（65.6%）,革兰阳性菌1 373株（34.4%）。标本来源以痰液为主（23.2%）,其次为血液（21.6%）和尿液（17.8%）。居前5位的菌种依次为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌,分别占20.9%、10.1%、9.4%、8.7%和7.4%。甲氧西林耐药金葡菌和CNS（MRSA和MRCNS）分别占各自菌株的21.3%和82.0%,未发现对万古霉素和替加环素耐药的葡萄球菌。肺炎链球菌中青霉素耐药株占16.4%,β溶血性链球菌对红霉素、克林霉素和四环素耐药率较高。屎肠球菌对多数抗菌药物的耐药率高于粪肠球菌,共检测出2株粪肠球菌对万古霉素耐药。大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌（肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌）中ESBLs的检出率分别为60.2%和27.2%,产ESBLs株对大多数抗菌药物的耐药率高于非产ESBLs株。肠杆菌科细菌对厄他培南和亚胺培南的耐药率均低于10%。铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率为8.7%。鲍曼不动杆菌除对左氧氟沙星耐药率为34.6%外,对其他常用抗菌药物的耐药率均大于50.0%,多重耐药鲍曼不动杆菌的检出率为74.9%。结论我院临床分离菌仍以革兰阴性杆菌为主,细菌耐药性仍是临床重要问题,尤其是耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌（CRKP）增加较快,应引起临床高度重视。     

血流感染葡萄球菌菌种分布及耐药特性分析

目的了解血流感染中葡萄球菌的菌种分布及其耐药特性,以指导临床合理使用抗菌药物。方法回顾性分析南昌大学第二附属医院2013年1月至2013年8月期间临床各科室送检的血培养标本中葡萄球菌的菌种分布和耐药特性。采用BACT/ALERT 3D全自动血培养仪进行培养,VITEK2-compact全自动细菌分析仪进行菌种鉴定和药敏试验。WHONET 5.6软件分析数据。结果共分离获得176株葡萄球菌,其中金黄色葡萄球菌24株,占13.6%;路邓葡萄球菌1株,占0.6%;凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)151株,占85.8%,人葡萄球菌53株、溶血葡萄球菌32株、表皮葡萄球菌23株及头状葡萄球菌15株居前四位。最常见的葡萄球菌分别为人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林CNS(MRCNS)检出率分别为29.2%和85.4%,对青霉素耐药率均100.0%,磺胺甲噁唑对MRSA(耐药率仅14.3%)有较强的体外抗菌活性,利福平对MRCNS(耐药率仅18.2%)有较强的体外抗菌活性,均未发现耐万古霉素、利奈唑胺和替加环素的菌株。结论葡萄球菌引起的血流感染菌种分布较广,以人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌为主,人葡萄球菌较金黄色葡萄球菌耐药及多重耐药性严重,但均仍对万古霉素、利奈唑胺、替加环素保持高度敏感。     

幽门螺杆菌Cag-PAI hp0525基因的克隆表达及其重组蛋白HP0525对SGC-7901细胞增殖的影响

目的：由于文献报道幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）是产生胃溃疡和胃癌的致病菌之一,一个重要的影响因素是由cag致病岛编码的四型分泌系统。Hp0525是Cag致病岛中重要成分,是一种内膜蛋白ATPase。而幽门螺杆菌中Cag蛋白的表达以及Cag PAI编码的各自蛋白功能研究得还很少,为进一步研究幽门螺杆菌的致病机制和研发幽门螺杆菌诊断试剂盒及疫苗,特克隆幽门螺杆菌NCTC 11637hp0525 (caga) 基因,并对其进行测序,构建原核重组质粒,表达HP0525蛋白,初步研究其对SGC-7901细胞增殖的影响。方法：应用PCR技术从H.pylori基因组DNA中扩增hp0525编码基因片段,克隆至pMD18-T载体后,再将其定向插入pET-30a载体中,双酶切鉴定筛选阳性克隆,以DNA自动分析仪进行序列测定。测序分析正确后,经IPTG诱导表达,表达蛋白以Ni2＋-NTA柱进行纯化,并经Western blot和MALDI-TOF鉴定,透析除盐后的蛋白,通过免疫新西兰大白兔和抗体效价的测定,纯化的蛋白作用于SGC-7901细胞,用MTT法检测蛋白对细胞增殖的影响。结果：成功克隆hp0525基因,全长993bp,编码330个氨基酸,与GenBank 公布的其他H.pylori菌株基因序列的核苷酸同源性为97%~99%。工程菌诱导后SDS-PAGE显示新生表达蛋白带,相对分子质量为36 000,与预期一致,经Ni2＋-NTA柱纯化后可获得纯度为98％重组蛋白。蛋白作用于SGC-7901细胞后,结果呈现一定量的时间和剂量依赖性。它是一种ATPase,通过测定具有一定的活性。活性为4.40IU/ml结论：成功克隆hp0525基因,并在大肠杆菌BL21中表达,经过镍柱纯化后得到纯度较高的蛋白, MTT法来检测出重组蛋白抑制细胞增殖;同时具有一定的酶活力,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。     

肠杆菌科细菌耐碳青霉烯类抗菌药物耐药机制的研究进展

碳青霉烯类药物由于其良好的细胞通透性及高度的酶稳定性,是治疗产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC酶革兰阴性杆菌感染的有效抗菌药物,对肠杆菌科细菌有非常强的抗菌活性,但随着临床的广泛应用,临床已出现了对其耐药的肠杆菌科细菌,且不断有新的耐药基因被发现。本文就其耐药机制、检测方法、常用抗菌药物的选择及预防措施等问题作一综述。     

耶氏肺孢子菌肺炎临床特点及KL-6诊断价值

目的分析本地区耶氏孢子菌肺炎(Pneumocystis jirovecii pneumonia,PJP)患者的流行趋势、临床特征、血清学标志物,为PJP患者的早预防、早诊断提供理论依据。方法回顾性分析江西省3所综合性医院2016年1月至2019年12月诊断为PJP的49例住院患者,收集患者临床资料,包括基本信息、危险因素、临床表现、实验室结果、影像学报告、预后等。结果49例PJP患者绝大多数HIV阴性(89.8%),且以中年男性为主。AIDS、肾脏疾病(47.7%)和结缔组织疾病(29.6%)为PJP患者主要危险因素,临床表现以干咳(83.7%)、白色黏痰,发热(79.6%)为主,其次为呼吸困难。PJP患者以低剂量/短时间(<3个月)使用糖皮质激素或免疫抑制剂为特征。85%以上PJP患者实验室指标超过参考范围的有中性粒细胞百分比、C反应蛋白、氧分压、乳酸脱氢酶和涎液化糖链抗原-6(KL-6)。结论HIV阴性患者感染PJ逐渐增多,肾脏疾病和结缔组织疾病是其主要危险因素,LDH、BG和KL-6可作为PJP患者的重要辅助检查。