稳定表达禽β防御素6的DF-1细胞系的建立及其抑菌活性

【背景】禽β防御素6是禽体内分泌的一类抗菌肽,在抵抗病原入侵和免疫调节中发挥着重要作用,但其常规表达方式效率较低,难以在产业化生产中加以应用。【目的】建立稳定表达AvBD6的细胞系,并检测其表达产物对耐药大肠杆菌的抗菌活性,为其他防御素表达提供参考。【方法】利用显微镜观察构建真核重组表达载体pLOV-eGFP-AvBD6转染至293T细胞后的转染效率;收集293T细胞上清液并感染DF-1细胞,通过嘌呤霉素加压筛选稳定表达株;利用RT-PCR和Western Blot分别检测目的基因在转录水平和蛋白水平的表达情况;利用扫描电镜观察细胞培养上清液对耐药大肠杆菌的抗菌效果及其对菌体的损伤。【结果】成功构建重组表达载体pLOV-eGFP-AvBD6,筛选出稳定表达AvBD6的DF-1细胞系,而且目的基因在转录水平和蛋白水平均有表达;细胞培养上清显著降低大肠杆菌和副伤寒沙门菌存活率,对金黄色葡萄球菌的抗菌活性较低。【结论】建立了稳定表达AvBD6的DF-1细胞系,其表达产物对耐药大肠杆菌具有良好的抗菌效果,对推动防御素的应用提供技术支持。     

禽源大肠杆菌耶尔森氏菌强毒力岛核心基因的检测及其irp2和int基因同源性

【目的】为了提高禽源大肠杆菌中耶尔森氏菌强毒力岛(HPI)的检测效率, 了解高分子量铁调节蛋白2基因(irp2)和整合酶基因(int)在不同株禽源HPI+大肠杆菌间的同源性, 进一步揭示禽源大肠杆菌HPI的转移规律。【方法】利用L16(44)正交试验设计, 建立针对HPI核心基因irp2和fyuA的双重PCR, 运用双重PCR方法检测禽源大肠杆菌临床分离株, 并对检出的7株HPI阳性(HPI+)大肠杆菌进行irp2和int基因测序及同源性分析, 同时结合这7株大肠杆菌的ERIC-PCR分析结果, 对比分析int基因的分布特点。【结果】结果显示, 新建立的双重PCR能特异性扩增出HPI核心基因; ERIC-PCR分析显示, HPI+大肠杆菌间差异均大于5%; HPI+大肠杆菌irp2基因高度保守(同源性大于99%), 而int基因虽然都位于asn-tRNA位点, 但基因序列在部分菌株间存在较大差异。【结论】建立了一种可以用于HPI的流行病学调查和实验室诊断的双重PCR方法, 并推测区域外同源重组可能是HPI基因在大肠杆菌间水平转移的主要方式。     

miR-let-7b慢病毒载体促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化

微小RNA在生命体生长、衰老的过程中起着重要的作用,参与骨髓间充质干细胞(MSCs)重要的生物学进程,包括增殖、分化、信号转导和死亡等。该文探讨了miR-let-7b对MSCs来源神经细胞的调控作用。体外分离、扩增大鼠MSCs,通过细胞形态学观察、表面标志物的流式细胞仪检测进行鉴定。将MSCs分为miR-let-7b+组、miR-let-7b-组和对照组,分别转染miR-let-7b慢病毒载体、Anti-rno-miR-let-7b Inhibitor载体及不进行任何转染操作,实时荧光定量PCR(RTq PCR)检测各组细胞miR-let-7b的表达水平,确认转染情况。多因子联合法诱导各组MSCs向神经细胞分化,RT-q PCR检测神经细胞标志物MAP-2的表达,免疫细胞化学染色检测神经原特异性烯醇化酶(NSE)的表达和各组MSCs的神经细胞分化率。分离培养的MSCs在镜下呈长梭形或成纤维细胞样,CD90、CD44阳性表达率均大于90%,CD45的表达不足2%,证实得到的细胞即为MSCs。RTq PCR结果显示,与对照组相比,miR-let-7b+组的miR-let-7b表达水平升高,miR-let-7b-组几乎未检测到miR-let-7,提示miR-let-7b载体及miR-let-7b Inhibitor载体均成功转染了MSCs。经诱导分化后,与对照组相比,miR-let-7b+组神经细胞标志蛋白SIM312、Gap43、MBP和NSE与对照组相比表达水平显著升高(P0.05);miR-let-7b-组SIM312、Gap43、MBP和NSE表达水平与miR-let-7b+组相比具有明显差异(P0.05)。结果提示,miR-let-7b可以促进MSCs向神经细胞分化,通过控制miR-let-7b的水平可以调控MSCs的神经细胞分化率。     

’99国际古人类学学术研讨会在北京召开

“国际古人类学学术研讨会暨北京猿人第一个头盖骨发现 ７０周年会议”于 １９９９年 １０月１２日至１６日在北京举行。来自美国、加拿大、英国、德国、法国、比利时、西班牙、瑞士、奥地利、挪威、斯洛文尼亚、巴西、日本、韩国、印度、印度尼西亚等十余个国家的科学家参加了本世纪末古人类学界的最后一次国际盛会。会议收到了来自国内外的 １００余篇论文摘要,内容涉及近年来古人类学、旧石器考古学、古脊椎动物学研究方面的重大发现及新技术、新方法在古生物学方面的运用。 纪念大会于 １９９９年 １０月 １２日在人民大会堂新闻厅隆重…     

99'北京国际古人类学学术研讨会召开

“９９’北京国际古人类学学术研讨会暨纪念北京猿人第一个头盖骨发现７０周年大会”于１９９９年１０月１２日至１６日在北京举行。来自美国、加拿大、英国、德国、法国、意大利、比利时、西班牙、瑞士、奥地利、捷克、挪威、斯洛文尼亚、南非、巴西、日本、韩国、以色列、印度、斯里兰卡、印度尼西亚、泰国等２０余个国家的科学家参加了本世纪末古人类学界的这次国际盛会。会议收到了来自国内外的１００余篇论文摘要,内容涉及近年来古人类学、旧石器考古学、古脊椎动物学研究方面的重大发现及新技术、新方法在古生物学方面的应用,并在会…     

蝉拟青霉菌丝体与天然蝉花中化学成分的比较分析

以天然蝉花Cordyceps cicadae做对比,对一株蝉拟青霉Paecilomyces cicadae菌株发酵菌丝体的化学成分进行了分析,包括粗成分、生物活性成分、无机元素、氨基酸、脂肪酸等。结果表明:蝉拟青霉菌丝体中虫草多糖的含量为33.2mg/g,甘露醇的含量为78.9mg/g,麦角甾醇的含量为0.6256mg/g,腺苷的含量为1.0620mg/g,钙、铁、锌、硒和锰微量元素的含量分别为5187.59μg/g、207.23μg/g、41.93μg/g、0.087μg/g和28.24μg/g,18种氨基酸齐全,不饱和脂肪酸是优势脂肪酸,以亚麻油酸、油酸为主,其相对含量分别为53.91%和20.63%,与天然蝉花相比,发酵菌丝体中虫草多糖、甘露醇、麦角甾醇、腺苷、氨基酸总量、必需氨基酸总量和不饱和脂肪酸的含量明显高于后者,其它化学成分和天然蝉花中相应成分基本一致。     

一组例题解析

[例1]:下面是有关脊蛙反射的实验。如图所示: (1)若将引起脊蛙搔扒反射的浸有0.5％硫酸溶液的小纸片贴在蛙背部皮肤上,将引起____活动,若贴在足趾皮肤上,则引起____活动。 (2)暴露出脊蛙支配后肢的脊神经根,给予适当的刺激,按下列甲、乙、丙三个示意图作答: A.甲图:刺激后根、引起_____;刺激前根,引起     

嗜虫书虱性信息素的提取方法和生物活性测定方法

首次利用嗜虫书虱Liposcelis entomophila雄虫分别爬向雌、雄虫的时间确定了嗜虫书虱是雌虫分泌的性信息素,而不是雄虫分泌的聚集信息素。首次在国内外对微小个体的啮齿目昆虫嗜虫书虱L.entomophila性信息素的提取方法和生物活性测定方法进行了研究。在自制圆盘诱捕器的生物活性测定试验中,雄虫爬向雌虫平均只需要(20.00±2.44)min(N=10),而雄虫爬向雄虫的时间平均需要(70.50±6.56)min,两者差异极显著(p<0.01),说明了是雌虫分泌的性信息素。采用有机溶剂(正己烷和二氯甲烷)浸泡法和顶空气体收集方法并用两种溶剂(正己烷和二氯甲烷)进行淋洗收集嗜虫书虱未交尾雌成虫性信息素,分别用自制的圆盘诱捕器和模拟仓诱捕器和“Y”型嗅觉仪三种方法对不同方法提取的性信息素粗提物进行了生物活性测定,结果表明:顶空气体收集法得到的正己烷淋洗液在自制的圆盘诱捕器诱捕法中对雄虫的引诱活性最强,其诱集系数和诱虫数分别是46.3%±4.2%和14.0±1.0,与未交配的雌虫的相当,两者差异不显著(p>0.05),与顶空气体收集法得到的二氯甲烷淋洗液及正己烷浸泡液和二氯甲烷浸泡液的差异均显著(p<0.05)。说明顶空气体收集法用正己烷淋洗方法可以用来收集嗜虫书虱雌成虫性信息素。不同生物活性测定方法研究表明“Y”型嗅觉仪是在理想的状态下进行的选择性试验,其对正己烷淋洗液的诱集系数和诱虫数均较高,分别为55.3%±6.3%和15.0±1.8,与圆盘诱捕法相比差异不显著(p>0.05),和模拟仓诱捕法相比差异显著(p<0.05)。因此在实际应用中主要考虑利用圆盘诱捕法对嗜虫书虱进行诱捕。     

ygeG基因对禽致病性大肠杆菌生物学特性及致病性的影响

【目的】本研究构建禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli, APEC) yge G基因缺失株,并对其进行生物学特性及致病性分析,探究yge G在APEC致病过程中的作用,为后期深入研究其所在的Ⅲ型分泌系统2 (type three secretion systems 2,ETT2)毒力岛的致病机制奠定基础。【方法】利用Red同源重组技术构建yge G缺失株APEC81-Δyge G及其回复株APEC81-CΔyge G,通过运动性、生物被膜形成能力、抗逆性、抗血清杀菌能力等试验分析yge G对APEC致病性相关的生物学功能的影响,并通过细胞黏附、侵袭试验及荧光定量PCR检测细胞炎性因子转录水平探究yge G对APEC感染宿主过程的影响。【结果】成功构建了缺失株APEC81-Δyge G和回复株APEC81-CΔyge G;与野生株APEC81相比,缺失株APEC81-Δyge G生长特性无显著变化(P>0.05),生物被膜形成能力显著降低(P<0.01),运动能力极显著升高(P<0.001),对酸休克和氧化休克的耐受力极显...     

漫谈集群绝灭(下)——集群绝灭的原因

关于集群绝灭的最关键的问题是：它的起因是什么？这方面的观点实在太多了。总的来说,一些人认为,所有集群绝灭都是由一个单一的因素导致的,而另一些人坚信每一事件都有其各自的独特原因。１９８４年劳普和塞普科斯基发现,在过去的２．５亿年中,集群绝灭存在明显的周...