垂体瘤转化基因1(PTTG1)的表达变化对人前列腺癌细胞LNCaP生长增殖的影响

垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)具有促进肿瘤生长和转移的作用.通过上调或下调基因表达的策略,观察PTTG1基因对人前列腺癌细胞株LNCaP细胞生长增殖的影响.利用PCR技术分离出PTTG1全长cDNA,分别正向和反向插入真核表达载体pIRES2-EGFP,重组载体分别命名为正义PTTG1-S/pIRES2-EGFP(即pI-P-S)和反义PTTG1-AS/pIRES2-EGFP(即pI-P-AS),将这两种重组载体稳定转染LNCaP细胞,通过流式细胞仪和MTT法分别检测了细胞周期和细胞增殖的情况.转染正义PTTG1后处于S期和G2期的细胞明显增加,细胞生长增殖能力增强;相反,转染反义PTTG1后处于S期和G2期细胞明显减少,细胞生长增殖能力减弱(P<0.05).结果表明,PTTG1能明显改变人前列腺癌细胞株LNCaP的细胞周期和细胞生长增殖能力,它的异常表达可能参与前列腺癌细胞生长增殖过程.     

雄激素受体辅助调节因子267-a的相互作用蛋白——死亡受体6的鉴定

为了研究新发现的雄激素受体辅助调节因子267-a(androgenreceptor-associatedcoregulator267-a,ARA267-a)的功能,以含有编码ARA267-a中4个PHD和1个SET结构域的cDNA片段构建诱饵重组表达质粒,采用酵母双杂交系统从人脑cDNA文库中筛选与之有相互作用的蛋白质.在筛选文库的阳性克隆中,经过DNA测序和在GenBank中的同源核苷酸序列比对,发现死亡受体-6(deathreceptor-6,DR6)是ARA267--PHD-SET的相互作用蛋白之一.通过再次酵母双杂交、体外免疫共沉淀和哺乳动物细胞双杂交证实DR6的胞内区可以与ARA267-a的PHD-SET结构域相结合.DR6是肿瘤坏死因子受体家族成员之一,它的胞内区含有死亡结构域,参与细胞凋亡信号的传导.这个研究结果提示:有ARA267-a参与的雄激素-雄激素受体通路与有DR6参与的细胞凋亡通路之间可能通过ARA267-a和DR6的相互作用而产生交叉联系.     

抑制消减杂交结合cDNA微阵列技术鉴定人肾癌组织高表达基因谱

为克隆肾癌组织高表达基因, 探讨肾癌发生、发展的分子基础, 以人肾癌组织mRNA为试验方, 正常肾组织mRNA为对照构建抑制消减杂交文库. 用文库379个克隆制作基因芯片, 以同位素标记探针对文库进行高通量筛选, 对肾癌组织中表达增高6倍以上的67个克隆进行测序, 结果在GenBank中进行比对分析, 其中4个克隆为新EST片段, 2个为KIAA类基因, 其余克隆为已知基因. 其中已有文献报道的肾癌相关基因, 如VEGF, 波形蛋白, 组织因子等, 大部分为新发现的肾癌相关基因, 包括锌带蛋白、垂体瘤转化基因1等. 3个EST及一些在肾癌组织中高表达的已知基因以Northern杂交、RT-PCR作了验证. 免疫组化与Western blot进一步证实锌带蛋白与垂体瘤转化基因1在肾癌组织中表达显著增强. 这些高表达的基因可能成为肾癌诊断、治疗的潜在靶点, 有助于从基因谱的角度进一步认识肾癌发生、发展的分子机制.     

垂体瘤转化基因(PTTG1)可抵抗UV诱导的细胞凋亡作用

垂体瘤转化基因（PTTG1）在很多肿瘤中呈高水平表达.越来越多的研究表明,PTTG1与细胞增殖、细胞转化有关.但PTTG1在凋亡中的作用仍不清楚.通过在细胞中下调和过表达PTTG1,观察PTTG1在UV照射诱导凋亡中的作用.结果发现, RNAi-介导下调HeLa细胞PTTG1表达可增加对UV诱导凋亡的敏感性,而过表达PTTG1则降低对UV诱导凋亡的敏感性.此外,UV照射能降低PTTG1蛋白的表达水平,并且表现为明显的剂量和时间关系.这些研究结果显示,PTTG1在UV照射诱导的凋亡中发挥重要的抗凋亡作用.这为研究PTTG1在肿瘤发生、发展中的作用机制提供了新的实验证据.     

MAGE-A1,A2,A3,A4在膀胱移行细胞癌组织及细胞株中基因表达的研究

目的研究膀胱移行细胞癌(TCC)中黑色素瘤抗原(MAGE)基因表达。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测20例膀胱TCC患者癌组织和3株膀胱TCC细胞株T24、EJ、BIU87中MAGE-A1、A2、A3、A4基因mRNA表达。结果20例膀胱TCC癌组织中19例(95%)至少表达一种MAGE-A基因,12例MAGE-A1阳性(60%),16例MAGE-A2阳性(80%),11例MAGE-A3阳性(55%),18例MAGE-A4阳性(90%),MAGE-A1-4均阳性8例(40%)。膀胱TCC细胞株T24中MAGE-A1-4基因均表达,EJ中MAGE-A3、A4基因表达,BIU87中MAGE-A2、A3、A4基因表达。结论MAGE基因在膀胱TCC中有较高表达,可望成为膀胱TCC免疫治疗的靶基因。