提高H9N2亚型禽流感病毒的拯救效率条件的优化

目的:在原有的8质粒转染体系的基础上,提高H9N2亚型禽流感病毒8质粒转染的效率。方法:以脂质体细胞转染法,用293T细胞和MDCK细胞共转染A/Chicken/Jiangsu/SH14(H9N2)禽流感病毒的8个连接在PHW2000载体上的反向遗传质粒,并且NS片段携带有GFP绿色荧光基因。通过TPCK胰酶的浓度,DMSO,尿囊液的作用,以及转染后孵育时间来摸索出最佳的转染条件。转染后48h用倒置荧光显微镜检测绿色荧光,并计算出转染效率。结果:通过统计学分析结果可见,转染后8h,使用DMSO处理后再加入1ug/m L的TPCK胰酶,转染效率最高,绿色荧光表达的最多。结论:我们通过联合DMSO和TPCK的方法一定程度上提高了H9N2亚型禽流感病毒8片段转染的效率。     

井岗山区农业害虫垂直分布的考察

1962年8月,我们在以往调查庐山、大茅山、黄岗山的基础上,选定了井岗山区为据点,对其农业害虫的垂直分布,进行了考察。 井岗山是我国革命的摇篮,位于江西中部,西邻湖南,约当北纬27°以南,东经114°以东,最高山峰在海拔1,700米左右。考察时根据地势高低,将全山划分为三个地段,即山麓(海拔 200米以下)、山腰(海拔 400—500米)及大山区(海拔 800—1,200米),再依植被生长情况,分别划为松杂灌林带、松阔叶林带及杉竹混合林带,并以附近的吉安市(平原     

异源基因α1,3半乳糖转移酶与增强型绿色荧光蛋白融合对荧光蛋白表达的影响

目的 研究异源(猪)基因α1,3半乳糖转移酶(3GT)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因形成的融合蛋白对其荧光表达量的影响.方法 BamHI,EcoRI酶切pcDNA3.1-α1,3GT重组载体后,回收含α1,3GT的片段,与BamHI、EcoRI酶切回收的pEGFP-N1载体连接,并酶切、测序鉴定重组真核表达载体p...     

基于CRISPR/Cas9系统筛选猪流行性腹泻病毒复制相关基因及其验证

【背景】成簇规律间隔的短回文重复序列相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein,CRISPR/Cas9)已被广泛证实是高效、强大的第三代基因编辑工具,在发现功能基因等领域取得了重要进展,但至今尚无利用该方法挖掘猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)宿主基因的报道。【目的】利用CRISPR/Cas9系统在全基因组范围内筛选PEDV复制相关基因,并进行候选基因的初步验证,为培育抗PEDV种猪提供科学参考。【方法】通过CRISPR/Cas9技术构建人肝癌细胞系(Huh-7)全基因组敲除文库,利用PEDV感染Huh-7文库细胞,随后经过高通量测序筛选影响PEDV复制的关键宿主因子,结合基因干扰和检测病毒效价等相关试验对影响PEDV复制的候选基因进行初步验证。【结果】构建了CRISPR/Cas9系统在全基因组范围内筛选PEDV复制相关基因的方法,将富集程度排名靠前的整合素α11(integrin α11,ITGA11)、哺乳动物复制蛋白A2(replication protein A2,RPA2)、驱动蛋白家族成员2A(kinesin family member 2A,KIF2A)、诱导髓系白血病细胞分化蛋白1(induced myeloid leukemia cell differentiation protein 1,MCL1)、多聚ADP核糖化酶1[poly(ADP-ribose)polymerase 1,PARP1]和囊泡单胺转运蛋白(vesicular monoamine transporter,SLC18A1)基因进行了验证;采用siRNA对上述基因分别进行干扰后,结果与对照组相比,干扰ITGA11可显著降低PEDV猪源靶向细胞IPEC-J2中PEDV-NmRNA、蛋白表达水平及子代病毒滴度。【结论】基于CRISPR/Cas9系统的全基因组敲除文库可作为挖掘PEDV复制相关功能基因的有效工具,ITGA11基因可作为一种制备抗PEDV猪种潜在的靶基因。     

东洋古北两区在西藏境内的分界线问题

东洋、古北两区在西藏境内的分界线,有的主张划在喜马拉雅山北麓,有的主张划在喜马拉雅山南麓,黄复生同志主张以喜马拉雅山主脊为界,并将位于念青唐古拉山和伯舒拉岭以东的横断山脉平行峡谷区(包括昌都、江达、察雅、贡觉、类乌齐、八宿等)归入东津区。(见《西藏昆虫》1:1—34,科学出版社,1981)众说纷纭,迄今未能完全一致。作者等以西藏农虫普查资料为基础,并根据实地考察,认为东洋区和古北区在西藏境内的分界线,应该划在喜马拉雅山南麓,具体的说,在喜马拉雅中、西段,应以南坡3000—3400m为界,即接近乔木自然林的上限高度;在喜马拉雅山东段及藏东横断山脉的三江流域,应以     

CMV和SP双启动子增强外源基因在骨骼肌细胞中的特异性表达

构建含有CMV和肌肉特异性启动子SP双启动子及报告基因EGFP的表达载体(Pentry-CMV-SP-Ghrh-EGFP),使得生长激素释放激素Ghrh在诱导分化的C2C12细胞中特异性表达。     

两种环糊精对α-淀粉酶活性稳定作用的研究

研究了β环糊精(βCD)、羟丙基β环糊精(HPβCD)对α淀粉酶活性的影响,结果表明βCD能明显稳定α淀粉酶活性,延长其储存时间(4℃)。而HPβCD能明显增加酶的荧光,说明其能更好地与芳香类氨基酸结合,但对酶的储存活性无明显延长作用。