小鼠内细胞团标志蛋白的性质、分离和纯化

我们用二相电泳方法在小鼠畸胎瘤系统中发现小鼠胚胎内细胞团标志蛋白双联体(分子量39,000,p14.4—4.5)也存在于未分化的胚胎癌细胞株(PSAI-NG2、F9、PCC3)中,但在已分化细胞株滋养层母细胞癌TDM1中用二相电泳方法不能检查到这蛋白。把EC细胞分为细胞质、细胞核、染色体三部分再进行检查,可以清楚地看到这蛋白主要存在于染色体部分。把染色体再分成0.35M NaCl可溶性,2M NaCl可溶性及2M NaCl不溶性三个组份时,则这蛋白出现在0.35M NaCl可溶性组分中,表明它是与染色体疏松结合的非组蛋白染色体蛋白。这蛋白是一种耐热性蛋白,在80℃受热10分钟不能使它变性。用制备型SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对经热处理的0.36M NaCl可溶性染色体蛋白进行分离,可得到电泳纯的小鼠内细胞团标志蛋白。由于这蛋白约占细胞总蛋白0.6%,与染色体疏松结合,又与早期胚胎细胞的多能性相关,提示它在维持多能细胞染色体构象方面有重要作用。     

一个小鼠未分化胚胎癌细胞特异cDNA的分子克隆

用胚胎癌细胞株(EC)PCC_3,的poly(A)~+RNA及质粒pBR 322在大肠杆菌中建立了一个eDNA文库。用另一株EC细胞F(?)及由EC细胞衍生的分化细胞株滋养层母细胞癌TDM_1的~(32)PcDNA作探针,对PCC_3 eDNA文库作了差别筛选。自3,000个cDNA克隆中筛出25个克隆。其中1个克隆MS,含有长250bp的cDNA。用MS,cDNA作探针,在F(?)细胞中能检出1个占poly(A)~+RNA约0.2—0.4％、长6kb的RNA(MS_3RNA)。用点印迹杂交及Northern印迹杂交分析法,证明MS_3RNA还存在于供试的另2株未分化EC细胞株PCC_3、PSA_1-NG_2中。在供试的全部分化细胞株,即TDM_1、PSA_1-2、3/A/1-D3、C_(17)-S_1-T(284)中,均查不到MS_3RNA。用Southern印迹杂交分析法,证明MS_3基因在小鼠基因组中存在着大量的拷贝,对小鼠胚胎基因文库的筛选表明,MS_3基因有一个中等重复的基因家族,这个家族在小鼠基因组中约有3,000个成员。     

三个MS3基因克隆的初步鉴定

我们已经克隆了一个小鼠未分化胚胎癌 (EC）细胞特异的cDNA )Rt序（MS, cDNA)o 用MS, cDNA作探针,证明编码MS3 cDNA的 基因在小鼠基因组中约有3,000个拷贝［w。由 于MS3 cDNA顺序较短,仅长250bp,就产生 了这样一个可能性：MS3 cDNA仅是一个中等 重复顺序,在绝大多数情况下,它分散在小鼠基 因组的不表达顺序中,虽然也存在于某些少数 基因中,但仅局限于3'端的非编码区。     

从提取细胞色素丙后的猪心残渣中制备辅酶Q_(10)的研究

辅酶Q_（10）（以下简称Q_（10）是一种新的生化药物,有重要的临床用途（中国科学院昆明动物研究所辅酶Q_（10）研究组,（1979）。Q_（10）的制备虽可采用化学合成法,但此法难度较大且不经济。自动物、植物、微生物中提取Q_（10）是国外工业生产Q_(10)的主要途径。我国大部分生物制药厂以猪心为原料生产细胞色素丙,因此经提取细胞色素丙后的猪心残渣数量极大。但这些猪心残渣一般被用作肥料或饲料。已知在猪心中Q_（10）含量丰富和Q_（10）在酸性条件下不稳定。（Korner,1974）于是这种经酸性溶液处理的猪心残渣是否还含有未分解的Q_（10）,其含量是多少?是综合利用这些猪心残渣的前提。本文证明,这种猪心残渣仍然含有未分解的Q_（10）,其含量与新鲜猪心中相同,从而为Q_（10）的工业生产找到了一种来源充足、价廉物美的原料。另外,本文比较并发展了一些Q_（10）的制备方法,为确定Q_（10）的工业生产工艺路线提供了实验依据。最后本文发展了一种Q_（10）的扫描薄层层析分析法,是目前已知各种Q_（10）分析法中较理想的一种。     

大鼠肝细胞核纯化、染色质分部及染色质非组蛋白双向凝胶电泳分析

本文使用改良的超离心法制备了大鼠肝细胞核,通过相差显微镜、电镜、转录活力及三种酶活力的测定,证实了所得细胞核较纯,其产率约为5％。使用羟基磷灰石(HAP)柱层析对染色质分部,并测定了各分部的紫外光谱。同时测定了核、染色质、染色质疏松结合非组蛋白(UP)、去up—染色质(UC)和HAP柱各分部的化学组成。对up和酚抽提法制得染色质紧密结合非组蛋白(NP)分别进行了双向凝胶电泳图谱分析。     

环六亚甲基双乙酰胺体外诱导胚胎性癌B7—2细胞分化对MS_3基因表达的影响

MS_3 cDNA是多潜能胚胎性癌细胞专一的顺序,HMBA可诱导B 7—2细胞分化为原始内胚层样细胞。用定量细胞质RNA点印迹杂交法分析了MS_3基因在小鼠胚胎性癌B 7—2细胞经HMBA诱导前和诱导后的表达水平。小鼠成纤维细胞NIH3T3被用作阴性对照,MS_3基因的表达水平在B 7—2细胞经HMBA诱导5天后下降了86％。鉴于HMBA对B 7—2细胞的诱导效率约为90％,这一实验结果表明在HMBA诱导分化中,MS_3基因的表达被抑制。     

用原位分子杂交技术检测F9-1EC细胞甲胎蛋白基因的表达

甲胎蛋白(AFP)是一种糖蛋白,在胚胎发育阶段先由卵黄囊合成,以后由胚胎肝合成,成年肝细胞不再合成或合成甚微,但是肝细胞癌变后又重新合成,并分泌到血液中,故属于癌胚性蛋白,是肝癌临床诊断和实验研究的重要标志物之一。     

辅酶Q_(10)的毒性试验及对溶血空斑形成细胞的刺激效应

辅酶Q_10（以下简称CoQ_(10)）是生物体内普遍存在的一类生物活性物质,具有重要的生理、生化作用。它是细胞呼吸链中主要的递氢体,在生物能量转化中占重要地位,它又能作为非特异性免疫增强剂,增强机体的防御能力,因此人们对于CoQ_(10)的临床研究越来越受到重视（中国科学院昆明动物研究所,1979）。 我们结合我国具体情况,独创地从提取细胞色素丙的猪心残渣中分离制备了CoQ_(10), （许以盛等,1985）,并与有关生产及临床单位协作,于1977年12月通过了鉴定,为我国的生化药物填补了一项空白。     

MS_3RNA在小鼠胚胎癌细胞中特异表达的可能机理(英文)

MS3 RNA是小鼠胚胎癌细胞特异RNA。为了阐明MS3基因在未分化细胞中特异表达的机理，我们应该首先确定此特异表达是在哪一级水平上被调控的。Naveh-Many等（1981）指出积极进行转录的基因一般是甲基化程度不足的。由于MS[3]基因有一个中等重复的家族，因此如果MS[3]基因的调控主要在转录水平上进行，我们应该发现MS[3]基因的甲基化程度在分化细胞及未分化细胞之间有明显差别，于是用测定甲基化程度的一组酶Hpa Ⅱ和Msp 1水介代表分化细胞的TDM[1]及代表未分化细胞的F[9]的高分子量DNA，然后用MS[3] Cdna作探针分析MS[3]基因区的甲基化程度。在可用MS[3] Cdna探查到的范围内，MS[3]基因区的甲基化程度在TDM[1]及F[9]细胞中未见明显不同。对这一结果可有四种不同解释：①MS[3]基因家族中除少数成员外其余绝大部分成员在未分化细胞中是不转录的，在分化细胞中则全部不转录；②MS[3]基因家族的绝大部分成员在未分化细胞以及在分化细胞中都是转录的；③虽然MS[3]基因家族中的绝大部分成员都是不转录的，但个别成员在未分化细胞以及分化细胞中都是转录的；④由于MS[3] Cdna只能探查MS3基因的分端区域，可能此区域的甲基化程度与MS[3]基因的转录水平无关。为了区别这些可能性，我们检查了F[9]细胞及TDM[1]细胞中的核RNA，发现在这二种细胞核内都存在着数量几乎相等的大量MS[3]基因转录物。因此我们推断，MS[3]基因家族中至少有一部分成员，很可能是大部分成员，不论在未分化细胞还是在分化细胞中都是转录的。在已分化细胞的细胞质中不能探查到MS[3] RNA的原因可能在于MS[3]基因在转录后水平上的调控，即在已分化细胞的核内缺乏加工MS[3] RNA前体的能力或缺乏把成熟的MS[3] RNA从细胞核输送到细胞质中去的能力。