致倦库蚊的生殖行为和寿命的实验室观察

1981年5—9月,笔者对致倦库蚊Culex pipiens quinquefasciatus Say的生殖行为及寿命进行了实验室观察。实验成虫采用从贵阳市区化粪池中捞回的蚊蛹羽化经鉴定确证者。成虫皆喂以10％蜂蜜水,并以小白鼠供血。实验室温、湿度及日照时间未加人工控制,每天三次测温、湿度,取其均值。吸血蚊置阴暗处(最大照度18Lux),其余蚊虫置室内自然光下(最大照度1,100—1,980Lux)。观察结果报告于下:     

蚊幼虫病原真菌贵阳腐霉的生物学研究

为了开发灭蚊真菌贵阳腐霉Pythiumguiyangense用于蚊虫防治,对贵阳腐霉生物学特性进行了研究。采用菌丝生长率、真菌产孢情况以及对致倦库蚊Culexquinquefaciatus1龄幼虫的毒力作为评价的指标。测试了7种人工培养基、7种单糖、7种氮源、真菌生长所需的pH范围和温度范围、以及4种光-暗比的光照程序对真菌的影响。结果证明该真菌生长的适合温度为5℃～35℃,最佳温度为25℃～30℃;适合pH范围是5～12;在pH9～11范围内菌丝和游动孢子生长最好;测试的人工培养基中,按照菌丝生长速度从高到低排列,依次为Czapek’SFE、PYG、KPYG2、SDAY、CMA和PDA。其中从真菌的游动孢子形成量和对蚊幼虫的毒力来看,最佳培养基为SFE;葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露糖和可溶性淀粉都是本真菌的合适碳氢营养源;含有机氮的培养基比含无机氮的培养基好;不同的光照程序没有表现明显的影响,但是观察到紫外光对本真菌有明显的抑制作用。     

分离自蚊幼虫的腐霉一新种及其rDNA的ITS区段分析

在一次室外蚊虫生物防治实验中,从被病菌感染的蚊幼虫体中分离到一株卵菌。根据其形态特征及其rDNA的ITS区段的碱基系列,鉴定为腐霉属一新种,命名为贵阳腐霉Pythiumguiyangense。对新种作了拉丁文描述。对新种与其近似种卡地腐霉P.carolinianum、奇雄腐霉P.middletonii和多卵腐霉P.multisporum的区别进行了讨论。模式标本(干培养物)保存在中国科学院微生物研究所菌物标本馆(HMAS),活培养物保存在贵阳医学院。     

根癌农杆菌介导的Pr1基因在贵阳腐霉的组成性表达

【目的】构建组成性表达贵阳腐霉Pr1基因的载体pCambia-hph-Pr1,转化贵阳腐霉,以获得高毒力的基因工程转化菌株。【方法】以双元载体pCambia-Pnos-PNN-hph为基本骨架,将Pr1基因置于组成型启动子PgpdA和终止子TtrpC之间,获得含Pr1基因的表达元件。以贵阳腐霉菌丝体为受体材料,利用根癌农杆菌介导的遗传转化法转化贵阳腐霉,观察转化株的生物学特征和灭蚊毒力。【结果】转化株的菌丝生长速度和游动孢子产量与野生株无显著性差异。生物测定表明转化株对蚊幼虫平均致死率达到32.9%,比野生株提高了约一倍,并且使受试蚊幼虫生长速度明显减缓。【结论】利用根癌农杆菌介导的遗传转化获得了遗传稳定的高毒力菌株。     

灭蚊真菌－贵阳腐霉对植物的安全性试验

The aim of this study is to investigate whether Pythium guiyangense, a mosquito-killing fungus isolated in Guiyang, Guizhou Province of China in 1994, is pathogenic to plants. Six common crops, Cucumis sativa, Lycopersicon esculentum, Capsicum annuum, Nicotiana tabacum, Brassica campestris and Oryza sativa were used as subjects for test. Zoospores of the fungus were used to infect the plants with soil inoculation method, caudex injection method and foliage spray method. Both positive control (using P. aphanidermatum) and negative control (using sterile water) were set up in all the experiments. The results showed that no infection was found on the tested plants in soil inoculation experiments. In caudex injection test, callus grew around the wounded tissue in most of the plants. Brownish rottenness could be found only in the injected wounds in a few plants, probably caused by saprophytic bacteria or other fungi, and the germ-carrying plants grew normally. No abnormal appearance was found on the six crops in foliage spray test. It was demonstrated that P. guiyangense could hardly infect plants in nature, and was a safe and promising agent for mosquito biological control.     

灭蚊真菌贵阳腐霉Pythium guiyangense对大鼠的长期安全性测试

为了解灭蚊真菌贵阳腐霉Pythium guiyangense对大鼠是否有长期毒性作用。将大鼠120只随机分4组,经饮水口服贵阳腐霉菌丝体。菌丝剂量分别为200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg,对照组饮自来水。分别于试验期的90d和180d各组取鼠总数的1/3处死进行检查,剩余1/3大鼠待停用菌丝体悬液2周后处死。观察大鼠一般情况、血常规、肝肾功能等各项生化和组织学指标。结果表明各组大鼠均发育正常,精神食欲好,体重增加;血液学、生化指标变化无明显的剂量-效应关系;内脏系数无异常;对重要脏器的解剖学及组织学检查未见明显异常。本研究结果证明灭蚊真菌贵阳腐霉对大鼠是安全的,从而为其在防治蚊虫的推广应用中的安全性提供了重要的毒理学依据。     

大链壶菌对白纹伊蚊及几种其它贵州蚊虫的杀灭作用的观察(英文)

采用大链壶菌在实验室内对白纹伊蚊及其它几种贵州蚊虫的幼虫进行杀灭试验。白纹伊蚊的感染率为25—89％,而致倦库蚊的感染率可达90—100％。实验结果为大链壶菌的宿主记录新增加一个属和五个种。     

根癌农杆菌介导灭蚊卵菌贵阳腐霉的遗传转化

Pythium guiyangense is a mosquito pathogen, and has been proved to be a promising agent for biological control of mosquitoes. In order to develop the strains adaptable to different ecological environment having stable virulence to mosquito larvae, and being able to prolong the shelf life, an effort was made on transforming the fungus by using homologous or heterologous virulence genes. In this paper, a genetic transformation experiment of P. guiyangense mediated by Agrobacterium tumefaciens is reported. As a result, an A. tumefaciens mediated genetic transformation system was established successfully.     

大链壶菌细胞核的初步研究

采用组织化学、荧光染色，透射电镜和小培养跟踪观察的方法对大链力细胞核进行了初步研究，观察到该菌细胞核的形状，数目睡其在细胞内的位置，以及游动孢子萌发过程中的核运动情况，为了解该菌的遗传结构进行初步的基础工作。     

海藻糖的生物合成与分解途经及其生物学功能

海藻糖是一类在干旱、低温、热击或脱水等逆境环境下具有独特抗逆保护作用的二糖,广泛分布于藻类、细菌、真菌和动植物体内。近年来,随着对海藻糖研究的深入,海藻糖已经被广泛应用到食品、医药、化妆品和分子生物学研究等领域。该文简述了海藻糖在生物体内的代谢途径、生物学功能和研究进展,并对灭蚊真菌Pythiumsp.GY1938菌株海藻糖代谢酶基因的研究前景加以展望。