用猪肝进行DNA的粗提取

人民教育出版社生物自然室编著的全日制普通高级中学教科书(试验修订本·必修)<生物>第二册中要求学生做"DNA的粗提取与鉴定"实验,实验材料是鸡血细胞液1.由于用鸡血细胞液为材料,实验成本高,且实验步骤繁多、操作时间长,有些学生当堂实验课不能完成,影响实验效果.     

L929细胞条件培养基诱导培养的小鼠原代巨噬细胞生物学特性对比

本研究旨在对比分析小鼠骨髓源巨噬细胞 (BMDM) 和腹腔巨噬细胞 (PM) 原代培养及巨噬细胞生物学特性差异,为合理选择原代巨噬细胞培养方法提供参考依据。原代培养小鼠BMDM和PM,细胞计数仪测定细胞数量,倒置显微镜观察形态学变化,流式细胞仪检测细胞纯度,CCK-8法测定细胞增殖,中性红吞噬实验测定细胞吞噬功能,实时荧光定量PCR分析巨噬细胞表型变化。结果显示,BMDM原代培养获取的细胞数量显著高于PM (P<0.01),PM贴壁及伸展时间早于BMDM。BMDM中F4/80+CD11b+百分比 (98.30%±0.53%) 高于PM (94.83%±1.42%),但无统计学差异 (P>0.05)。在L929细胞条件培养基培养体系中,BMDM增殖能力显著高于PM (P<0.001)。吞噬实验发现,基础状态下BMDM吞噬能力显著高于PM (P<0.01),经LPS刺激24 h后,除低剂量LPS (0.1 μg/mL) 外,BMDM吞噬能力均显著高于PM (P<0.01或P<0.001),提示BMDM吞噬能力在基础和激活状态下均强于PM。巨噬细胞极化实验发现,基础状态下Tnfα在BMDM中表达显著高于PM (P<0.001),Arg1和Ym1在BMDM中表达显著低于PM (P<0.001),这一差异在极化诱导剂 (LPS+IFN-γ或IL-4) 处理后依然存在。上述结果表明,原代培养BMDM较PM可获取更多细胞,且两种细胞在吞噬功能和极化状态上存在一定生物学差异,应谨慎合理选择巨噬细胞原代培养方法。     

胃癌细胞对化疗药物的敏感性及其与Pgp、GST-π和Topo Ⅱ表达的关系

目的探讨胃癌在体外对化疗药物的敏感性和与P-糖蛋白(P-glycoprotein Pgp)、谷胱甘肽S转移酶π(glutathione-S-transferase GST-π)和拓扑异构酶Ⅱ(topoisomeraseⅡ TopoⅡ)表达的关系。方法收集81例手术切除胃癌标本,制备单细胞悬液,分别加入HCPT、CDDP、ADM、5-Fu和MMC培养48h,用MTT比色法检测胃癌细胞对化疗药物的敏感性;免疫组化技术检测Pgp、GST-π和TopoⅡ蛋白在胃癌组织中的表达。结果胃癌细胞对不同化疗药物敏感性不同:5-Fu(43.4±9.2)、CDDP(41.9±8.7)和HCPT(40.6±8.3)对胃癌细胞的抑制率与ADM(31.6±7.8)和MMC(28.7±7.3)比较有统计学意义(P0.05)。胃癌组织中Pgp、GST-π和TopoⅡ蛋白的阳性率分别为61.33%、65.33%和68.00%。Pgp阳性者显示对ADM、HCPT有明显的体外耐药性(P0.05),GST-π在5-Fu、CDDP和MMC耐药组阳性率显著高于敏感组(P0.05),而TopoⅡ在HCPT、ADM和MMC耐药组中的表达显著低于敏感组(P0.05)。结论 Pgp、GST-π和TopoⅡ可以作为胃癌对化疗药物原发性耐药的标志,结合MTT药敏检测,有助于筛选有效化疗药物。     

巢湖及其支流浮游动物群落结构特征及水质评价

2013年9月至2014年6月对巢湖及柘皋河、杭埠河、南淝河3条支流的浮游动物进行了调查,共检出浮游动物297种,其中,原生动物124种,轮虫135种,枝角类29种,桡足类9种。南淝河浮游动物物种数最多,为203种,巢湖最少,为130种;巢湖及3条支流均以原生动物和轮虫物种数最多。浮游动物总密度为644 223 ind/L,柘皋河浮游动物密度最高,巢湖浮游动物密度最低,巢湖及3条支流原生动物密度占浮游动物总密度的比例均为最高;四个季节柘皋河浮游动物密度均为最高。浮游动物总生物量为253.14 mg/L,南淝河浮游动物生物量最高,杭埠河和巢湖浮游动物生物量较低;春季和冬季柘皋河浮游动物生物量最高,夏季和秋季南淝河浮游动物生物量最高。相较3条支流,巢湖浮游动物优势种数最少。依据理化指标,巢湖及3条支流为富营养或超富营养水平,营养水平为:南淝河巢湖柘皋河杭埠河。浮游动物群落结构和环境因子的冗余分析(RDA)表明,巢湖及3条支流浮游动物群落结构在四个季节均未能明显区分开,浮游动物群落和环境理化因子的相关性较小。