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利用人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)cDNA3′端非翻译区(3′-UTR)中存在的DraⅠ酶切位点,通过部分酶切与完全酶切,删除3′-UTR不同长度,构建了四种hG-CSFcDNA瞬时重组表达质粒。转染COS-7细胞后,生物活性测定结果提示,hG-CSFcDNA3′-UTR对其表达起负调控作用,其关键性序列位于紧接终止密码子TGA下游的65bp范围内,3′-UTR对hG-CSFcDNA表达的影响与转录水平的差别有一定关系。 相似文献
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目的观察SHP-2^D61G/+酪氨酸磷酸酶激活突变对组织白细胞浸润、细胞因子分泌及多器官损伤的影响。方法分别以SHP-2^D61G/+激活突变敲入的模型小鼠和野生型C57BL/6小鼠为研究对象,ELISA法检测小鼠血清和白细胞培养上清液中IL-2及TNF-α浓度;采用常规组织切片和HE染色观察心、肺、脾等组织病理学改变;放射免疫法检测血清中丙氨酸转氨酶和心肌肌钙蛋白Ⅰ的水平。结果SHP-2^D61G/+激活突变小鼠脾、肺组织中白细胞浸润较野生型对照小鼠明显增加,心肌肥大,出现明显炎症损伤型组织学变化;与野生型对照相比,突变小鼠血清及白细胞培养上清液中IL-2和TNF-α浓度均显著增加(P<0.01),血清丙氨酸转氨酶及心肌肌钙蛋白Ⅰ水平亦显著增高(P<0.01)。结论SHP-2^D61G/+激活突变增强白细胞分泌炎症因子的能力,促进组织白细胞严重浸润和脾、肺、心等多器官损伤,进而导致多器官功能障碍。 相似文献
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利用人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF()cDNA3'端非翻译区(3'UTR)中存在的DraI酶切位点,通过部分酶切与完全酶切,删除3'-UTR不同长度构建了四种hG-CSF cDNA瞬时重组表达质粒,转染COS-7细胞手,生物活性测定结果提示,hG-CSFcDNA3'-UTR对其表达起负调控作用,其关键性序列位于紧接终止密码子TGA下游的65bp范围内,3'-UTR对hG-CSF cDNA表达的 相似文献
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通过DNA重组技术,将不含非编码区的hEPO cDNA片段重组到逆转录病毒质粒pLXSN, pLNCX中重组质粒转染PA317细胞后,经G418筛选,抗性克隆细胞培养上清能成功地感染NIH3T3细胞,使之在筛选培养基中形成典型的G418抗性克隆,该克隆细胞染色体中成功地整合了EPOcDNA,并且表达出有生物学活性的红细胞生成素(EPO)产物。 相似文献
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中国人γ-干扰素cDNA在大肠杆菌中的高效表达 总被引:5,自引:0,他引:5
应用RT-PCR技术从中国人淋巴细胞mRNA反转录产物中克隆了IFN-γcDNA,序列分析证实了分子进化规律对IFN-γcDNA序列存在多态性的推论.在此基础上应用DNA重组技术,将去信号肽中国人IFN-γcDNA克隆到原核表达质粒pBV220 PRPL启动子下游,转化大肠杆菌DH5α,通过温度诱导表达,成功地在大肠杆菌中稳定、高效地表达了中国人IFN-γcDNA,其表达水平占全菌可溶性总蛋白的44.4%,初步复性后生物学活性测定结果表明γ-IFN表达量为0.45×107~2.34×107单位/L. 相似文献
8.
中国人r——干扰素cDNA在大肠杆菌中的高效表达 总被引:2,自引:0,他引:2
应用RT-PCR技术从中国人淋巴细胞mRNA反转录产物中克隆了IFN-r-cDNA,序列分析证实了分子进化规律对IFN-rcDNA序列存在多态性的推论。在此基础上应用DNA重组技术,将去信号肽中国人IFN-r cDNA克隆到原核表达质粒pBV220 PRPL启动子下游,转化大肠杆菌DH5a,通过温度诱导表达,成功地在大肠杆菌中稳定、高效地表达了中国人IFN-r cDNA,其表达水平占全菌可溶性总 相似文献
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人粒细胞集落刺激因子hG—CSF cDNA在大肠杆菌中表… 总被引:6,自引:0,他引:6
在不改变编码蛋白质氨基酸序列的前提下,利用合成DNA接头的方法,在原始cDNA克隆基础上,构建了5'端密码子富含AT的hG-CSF cDNA突变体,使hG-CSF cDNA得以在大肠杆菌中表达,但表达水平很低,借助相同的手段,在hG-CSF cDNA 5'端增加24核苷酸对的FLAG肽编码序列,构建了hG-CSF杂合蛋白(在hG-CSF成熟蛋白N末端增加8氨基酸残基FLAG肽,二者结合点为肠激肽酶 相似文献
10.
从LPS刺激的正常中国人外周血单核细胞中提取mRNA,经反转录(RT)-PCR扩增出不含信号肽和成熟型N端5氨基酸(V5-hG-CSF)的cDNA片段,酶切后组入大肠杆菌表达载体pJLA602中。序列测定表明,克隆片段与国外报道的高活性hG-CSF cDNA序列一致。重组子经诱导表达、小鼠骨髓细胞体外CFU-G测试表明,表达产物具明显的粒细胞集落刺激活性。 相似文献