抗人apo E单克隆抗体细胞株的建立及其性质分析

载脂蛋白E(apo E)是人血液中重要的载脂蛋白成分之一,其遗传表型和血液浓度与高脂蛋白血症及动脉粥样硬化关系密切。制备单克隆抗体和建立相应的免疫化学技术是测定人apo E表型和浓度的重要途径。 利用本室建立的不连续密度梯度超速离心     

用改进的重叠PCR引入血管内皮生长因子基因突变

血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的PCR产物克隆于T载体上,经转化JM109感受态菌株后,随机挑取8个白斑菌落,混合后制成混合模板.采用3条引物,做两轮重叠PCR反应,获得了VEGF的突变基因,经PCR鉴定,酶切鉴定和测序分析表明所得基因为目的产物.实践证明这种突变方法简单快速,为下一步实验大量引入突变奠定了实验基础.     

CaMBP-10单克隆抗体的制备及CaMBP-10在豌豆器官中的表达检测

用电泳纯钙调素结合蛋白BP 10 (CaMBP 10 )免疫小鼠 ,制备单克隆抗体 (McAb) .用MEP(mercapto ethtyl pyridine)HyperCel疏水层析柱从细胞培养上清中纯化并获得单克隆抗体 ,同时测定了抗体 抗原反应的基本特性 .此单克隆抗体具有较高纯度、特异性和亲和力 .亲和常数 (Kaff)为1 2 6× 10 9(mol L) -1,此抗体和CaM在空间上以相同或相近的位点与CaMBP 10相结合 .以胶体金标记的抗体为探针 ,研究CaMBP 10在豌豆幼叶、成熟叶、茎尖、茎、根等不同器官的分布特征 ,并与胶体金标记CaM的结合情况相对照 .结果显示 ,CaMBP 10在植物中的分布特点与文献报道的CaM的分布特点相一致 ,提示CaMBP 10可能是在蛋白水平上对CaM进行区域化和可用性调节     

cDNA文库构建方法的进展

cDNA文库构建是基因克隆的重要方法之一。从cDNA文库中能够筛选到所需的目的基因,并直接用于该目的基因的表达,它是发现新基因和研究基因功能的基础工具,本文介绍几种cDNA文库构建中的改进技术,并着重阐述其原理和特点。     

人A1AT蛋白的生物信息学分析

通过生物信息学预测分析程序发现,人A1AT(alpha-1 antitrypsin)蛋白是由418个氨基酸组成的外分泌蛋白质,其等电点为5.37。同源性分析推断,在其第73~93位和第351~372位氨基酸间存在两个重要的功能区域。此外,A1AT蛋白二级结构中存在13个较大的α螺旋区域,占总蛋白质的42.58%。高级结构的分析发现,RCL结构域的存在对A1AT的结构和功能具有重要的影响。GO和KEGG分析发现,A1AT参与机体抗炎症反应、凝血反应以及细胞的迁移、侵袭、增殖过程。分析所得的A1AT生物信息学数据为其在疾病诊断和治疗方面的研究提供了重要的理论数据。     

杀伤血管内皮生长因子受体 1 阳性细胞的靶向毒素

白喉毒素 (diphtheria toxin DT) 是棒状白喉杆菌被β噬菌体感染后分泌的一种外毒素. 它可以阻断真核细胞的蛋白质合成,杀死细胞. 血管内皮生长因子 (VEGF) 的 R82A, K84A, H86A 突变体可以和肿瘤血管上高表达的 VEGF 受体 1 (VEGFR-1) 特异性结合. 首先从白喉杆菌中提取基因组 DNA,扩增出白喉毒素 C 区、 T 区基因. 并运用点突变技术,制成 VEGF 的 R82A, K84A, H86A 突变体. 利用这个可以和肿瘤血管上特异性受体相结合的 VEGF 的突变体,代替白喉毒素上的受体结合区,制成了针对 VEGFR-1 的靶向融合毒素——— DT391-mVEGF. 以去除了受体结合区的 DT391 为阴性对照,细胞实验表明,融合毒素对 VEGFR-1 阳性的肿瘤细胞有特异性杀伤作用.